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ASTER技术实现了宽视场下的高定位精确度

SAFe纳米显微镜具备相同的独特激发系统,这种系统基于可调谐激发区的适应性扫描(ASTER)技术。1ASTER在TIRF、HiLo和EPI模式下产生均匀的照明,同时执行SMLM模式(如PALM、STORM或PAINT),在3D中150 x 150 µm2视场(FOV)上的定位精确度达到10-15 nm。

ASTER的示意图和产生的照明模式

ASTER的示意图和产生的照明模式。

ASTER的照明方法提供了一种新功能,可以利用sCMOS摄像头的整个FOV进行SMLM和TIRF成像。

ASTER使用两个扫描振镜来控制样品平面的照明。当激发光束在后焦面(BFP)保持其位置时,扫描振镜的角度旋转会在BFP中引入一个接近的角度,对应样品平面的不同位置。

通过应用特定的模式(如光栅扫描),ASTER可以为所有的激发模式(EPI、HiLo和TIRF)在最大150 × 150 µm2的可调谐FOV上提供均匀的激发。

大视野 TIRF成像与均质照明

奥林巴斯是TIRF显微镜领域的先驱,我们的TIRF物镜系列均可精确的控制在TIRF成像中产生的消逝波,放大倍率范围为60X至150X。APON100XHOTIRF物镜拥有较高的NA,能达到1.7*,而UPLAPO60XOHR和UPLAPO100XOHR是首个NA为1.5的平场复消色差物镜*。

借助奥林巴斯的光学器件和Abbelight的ASTER照明技术,用户可以在较大的视野上实现均匀的TIRF照明。

*截至2018年11月。根据奥林巴斯的研究结果。

大视野TIRF

培养的海马神经元的血影蛋白细胞骨架染色,在TIRF显微模式下成像。使用Abbelight ASTER技术,在Hamamatsu Fusion sCMOS摄像头(大于摄像头端口尺寸)的整个视场内实现了均匀的TIRF。样本承蒙马赛神经细胞实验室的C. Leterrier提供,图像承蒙奥赛ISMO的Adrien Mau提供。

使用远红外光谱分层的多色成像

U2OS细胞的微管(α-微管蛋白抗体)CF660、线粒体(抗TOMM20)CF680和染色质(EdU)AF647接受染色。多色2D dSTORM与光谱同时分层。

光谱分层:使用一种激光、一种缓冲液和一次采集实现多色成像

尽管3D纳米显微术可获得前所未有的分辨率,彻底改变了荧光显微成像领域,但多色成像在SMLM中仍然具有挑战性。这种困难是由几个因素造成的,包括色差、缓冲液的选择和单分子相容染料的选择。

为了解决这一挑战,Abbelight在SMLM中实现了光谱分层。通过使用滤色块和比率算法拆分远红外染料,光谱分层可以在SMLM中同时进行多色成像。

参考文献

1: A. Mau, K. Friedl, C. Leterrier, N. Bourg, and S. Lévêque-Fort. Fast scanned widefield scheme provides tunable and uniform illumination for optimized SMLM on large fields of view. Nature Communication. May 21, 2020.

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