使用培养监测系统监测U形底多孔板中细胞球的形成

实验概述

细胞球是3D细胞团块，可以模拟体内组织的特征，这使其对一系列评估颇具价值，如测试干细胞的分化潜力或药效。U形底板通常用于形成细胞球。进行该实验是为了评估奥林巴斯Provi CM20培养监测系统在监测U形底板上细胞球形成方面的优势。

实验步骤

将小鼠神经干细胞接种在96孔U形底板（Sumitomo Bakelite，目录编号MS-9096U）上，接种密度为2,500个细胞/0.1 mL/孔，使用不含L-谷氨酰胺或HEPES缓冲液的低渗透压培养基并补充有1x B27、1x GlutaMax、20 ng/mL bFGF、10 ng/mL EGF、0.0002%肝素、1%青霉素-链霉素。

将制备好的96孔板放置在Provi CM20培养监测系统上。手动设置聚焦位置，并且CM20系统在60小时的时间内每小时自动对细胞成像，以监测细胞球的形成。

结果

图1.小鼠神经干细胞的细胞球形成

通过评估采集的图像，我们能够得出结论，在接种后，细胞迅速聚集在一起，在大约10小时后形成细胞球，然后体积逐渐增大。

使用CM20系统进行细胞培养评估的优势

Provi CM20系统成功地在U形多孔板上成像。这种方法的一个主要优势是，细胞可以在孵化器中始终不受干扰，从而减轻成像过程对细胞球形成的影响。该实验还表明，使用CM20时，聚焦位置只需设置一次，然后可以保持多天，即使是悬浮液中的对象也是如此。基于这些结果，我们可以得出结论，Provi CM20系统可用于使用U形底96孔板进行高通量延时分析。这对于球状肿瘤模型中的药物筛选特别有用。我们还预测，CM20系统可用于监测干细胞（例如神经干细胞）或胚状体(EB)的分化，并且我们打算在未来的实验中测试这种方法对此类应用的适用性。

致谢

本应用说明由以下研究人员协助编写：
ACEL, Inc. 首席研究员 Takahiro Yamaguchi 博士

Evident、Evident徽标和奥林巴斯Provi是Evident Corporation或其子公司的商标。