药物功效评估——共培养微球对药物的反应

将共聚焦观察与该系统结合使用，可以评估使用适当荧光染料染色的共培养微球的药物功效。

目的

大多数抗癌药的功效测定方法均依赖于以2D单层生长固定化细胞的使用。但是，这些2D单分子层无法囊括诸如3D结构内部等癌细胞的复杂天然环境。因此，诸如微球之类的3D细胞培养吸引了人们的注意。此外，由两种或两种以上类型细胞组成的共培养微球系统在研究细胞间相互作用或细胞激活机制方面的应用已经成熟。本研究通过系统的荧光图像分析功能研究了氯喹（CHL）对由U20S和HT-29组成共培养微球的影响。

样品的制备

含有表达YFP的转基因U20S和HT-29的细胞悬液以50个转基因U20S细胞/孔和450 HT-29细胞/孔的浓度种入96U孔板（SUMITOMO BAKELITE CO., LTD）中。在细胞培养开始后48小时，将连续稀释的CHL加入到每个孔内。在添加CHL 48小时后，将Hoechst 33342（细胞核染色染料）和碘化丙啶（PI：死细胞染色染料）添加到每个孔内。针对YFP荧光的观察可以区分U20S和HT-29。

结论
荧光图像的采集和分析

获得上述微球的荧光图像。如图所示，随着CHL浓度的增加，共培养微球失去了3D结构的完整性。有趣的是，HT-29细胞完全分散，而U20S细胞（绿色伪彩）则始终保持聚集状态。另外，随着CHL浓度的增加，死细胞（红色伪彩）相对所有细胞（蓝色伪彩）的比率也会增加。利用分析软件进行细胞核的识别和计数结果，可以用图形方式显示相对于CHL浓度的比率。这些结果表明，利用一个微孔板内的共培养微球可以轻松评估药物功效。

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