Sistemas Abbelight SAFe

Tecnologias aplicadas

Tecnologia ASTER para alta precisão de localização em um amplo campo de visão

Todos os nanoscópios SAFe compartilham o mesmo sistema de excitação exclusivo, que é baseado na tecnologia Adaptable Scanning for Tunable Excitation Regions (ASTER - Escaneamento adaptável para regiões de excitação sintonizáveis).¹ O ASTER gera iluminação homogênea nos modos TIRF, HiLo e EPI enquanto realiza modalidades SMLM como PALM, STORM ou PAINT com uma precisão de localização de 10 a 15 nm em 3D em um campo de visão (FOV) de 150 x 150 µm².

Esquema do ASTER e os padrões de iluminação resultantes

Esquema do ASTER e os padrões de iluminação resultantes.

O método de iluminação ASTER oferece uma nova capacidade de explorar todo o FOV de câmeras sCMOS para formação de imagens SMLM e TIRF.

O ASTER usa dois espelhos de galvanômetro para controlar a iluminação no plano da amostra. Enquanto o feixe de excitação mantém sua posição no plano focal traseiro (BFP - Back Focal Plane), uma rotação angular de um galvanômetro induz um ângulo semelhante no BFP, correspondendo a uma posição diferente no plano da amostra.

Aplicando padrões específicos, como rastreamento raster, o ASTER pode fornecer excitação uniforme em FOVs sintonizáveis de até 150 × 150 µm² para todos os modos de excitação (EPI, HiLo e TIRF).

Formação de imagem TIRF do FOV com iluminação homogênea

A Olympus é pioneira no campo da microscopia TIRF e nossa gama de objetivas TIRF é projetada para fornecer controle rígido sobre a onda evanescente produzida na formação de imagens TIRF com ampliações que variam de 60X a 150X. A objetiva APON100XHOTIRF tem a maior AN do mundo de 1,7*, enquanto a UPLAPO60XOHR e a UPLAPO100XOHR são as primeiras objetivas apocromáticas do mundo com uma AN de 1,5*.

Com a óptica da Olympus e a tecnologia de iluminação ASTER da Abbelight, os usuários podem obter iluminação TIRF homogênea em um amplo FOV.

_{*A partir de novembro de 2018. De acordo com a pesquisa da Olympus.}

_{Neurônios hipocampais cultivados tingidos para citoesqueleto de espectrina e imagens adquiridas no modo de microscopia TIRF. O TIRF homogêneo em todo o campo de visão de uma câmera sCMOS da Hamamatsu Fusion (maior que o tamanho da porta da câmera) foi obtido usando a tecnologia ASTER da Abbelight. Amostra cortesia de C. Leterrier, NeuroCytoLab, Marseille, e imagens de Adrien Mau, ISMO, Orsay.}

Formação de imagens multicoloridas usando desmixagem espectral de vermelho escuro

_{Células U2OS tingidas para microtúbulos (anticorpo alfa-tubulina) CF660, mitocôndria (anti-TOMM20) CF680 e cromatina (EdU) AF647. dSTORM 2D multicolorido simultâneo com desmixagem espectral.}

Desmixagem espectral: formação de imagens multicoloridas com um laser, um buffer e uma aquisição

Embora a nanoscopia 3D tenha revolucionado o campo da microscopia de fluorescência ao atingir resoluções sem precedentes, a formação de imagens multicoloridas continua sendo um desafio em SMLM. Essa dificuldade se deve a vários fatores, incluindo aberrações cromáticas, a escolha de buffers e a escolha de corantes compatíveis com moléculas únicas.

Para enfrentar esse desafio, a Abbelight implementou desmixagem espectral na SMLM. Ao separar corantes vermelhos escuros usando um cubo dicróico e algoritmos raciométricos, a desmixagem espectral permite formar imagens multicoloridas simultâneas em SMLM de forma elegante.

Referências

1: A. Mau, K. Friedl, C. Leterrier, N. Bourg, and S. Lévêque-Fort. Fast scanned widefield scheme provides tunable and uniform illumination for optimized SMLM on large fields of view. Nature Communication. May 21, 2020.

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