Para ter uma iluminação clara e uniforme em um microscópio nem sempre basta ligar a fonte de luz. Os microscópios são sistemas ópticos sofisticados que precisam de cuidado e ajuste para produzirem imagens de qualidade ideal. Um dos alinhamentos ópticos mais fáceis é a iluminação Köhler para imagens de campo claro de luz transmitida.
O processo de alinhamento da iluminação Köhler é o mesmo em microscópios verticais e invertidos, mas a posição do condensador, do limitador de campo visual e do diafragma de abertura pode ser diferente. Consulte o manual do seu microscópio se tiver problema para localizar esses componentes.
Dica profissional: verifique se os componentes ópticos estão limpos antes de iniciar o processo. Uma objetiva suja pode dificultar desnecessariamente o alinhamento Köhler.
1. Mude para uma objetiva de baixa ampliação
Mudar para uma objetiva de baixa ampliação no microscópio, como 10X, oferece um amplo campo de visão e grande profundidade de foco.
2. Focalize a amostra
Para garantir a posição correta das aberturas na trajetória ótica, focalize a amostra como o ponto de partida para o restante dos ajustes ópticos.
3. Feche o diafragma de campo
Assim que a amostra estiver focalizada, feche totalmente o diafragma de campo. Se estiver desfocado, ajuste a altura do condensador até que as lâminas no diafragma de campo estejam as mais nítidas possível, correspondendo ao foco da amostra.
4. Centralize o diafragma de campo
Em seguida, ajuste a posição do diafragma de campo para que fique no centro da imagem do microscópio. Use os dois botões giratórios na parte da frente do condensador para ajustar a posição XY do diafragma de campo.
Para confirmar a posição central, abra o diafragma de campo até ver as bordas do octágono chegarem à borda do diafragma de campo. Ajuste conforme o necessário.
5. Ajuste o diafragma de abertura
Depois de ter uma imagem, ajuste o diafragma de abertura para controlar o contraste e a resolução. Você pode usar lentes Bertrand ou elemento óptico similar para ver o plano focal traseiro. Você deve ajustar para cerca de 75% do campo de visão.
Comparação da qualidade da imagem quando o ajuste do diafragma de abertura é muito amplo (esquerda), ideal (centro) e muito pequeno (direita).
6. Elimine o diafragma de campo do campo de visão
Por fim, abra o diafragma de campo para que fique fora do campo de visão. Evite abrir completamente porque isso causará a degradação da imagem.
Pronto! Agora você tem um campo claro e uniforme de iluminação para imagens de microscopia de alta qualidade.
Se tiver interesse em saber mais sobre a iluminação Köhler, confira o Centro de recursos de microscópios que analisa a técnica em detalhes.
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