1. Qual é o tamanho do espécime?

As objetivas de microscópio da Olympus apresentam uma gama de ampliações de 1,25 a 150x. Este é o primeiro parâmetro a se levar em consideração para encontrar a melhor objetiva para a sua aplicação. Em conjunto com a ampliação fornecida pelas oculares, é determinada a ampliação global do microscópio.

2. Quais são as menores características do espécime que você pretende observar?

O segundo parâmetro mais importante da objetiva de um microscópio é a abertura numérica (AN). A AN mede a sua capacidade de absorver luz. É um fator importante determinar a resolução, a profundidade de foco e o brilho das imagens. As objetivas com uma AN maior absorvem uma gama de luz mais ampla, resultando em imagens mais claras e com maior resolução.

A AN também é importante para observar estruturas muito finas ou detectar sinais fracos durante a observação com fluorescência. Ao determinar qual objetiva de microscópio irá determinar a menor característica do seu espécime, pense na AN. Ao ponderar as suas opções, tenha em mente que a abertura numérica oscila entre 0,04 e 1,7.

3. Quais são os requisitos de campo de visão e profundidade de campo da imagem?

Duas características importantes das objetivas de microscópio são o número de campo e a profundidade do campo.

• O número do campo de visão, ou número de campo, é o diâmetro do campo de visão no seu microscópio óptico. É expresso em milímetros e medido no plano de imagem intermediário. Tenha em mente que objetivas apocromáticas de plano moderno e outras objetivas de campo plano especializadas possuem frequentemente um campo útil que oscila entre 22 e 26,5 milímetros (ou mais quando combinadas com oculares de campo amplo).
• A profundidade do campo da objetiva é o intervalo axial, que permite focar uma objetiva sem qualquer alteração significativa na nitidez da imagem. Este valor varia radicalmente entre objetivas de abertura numérica baixa e alta; ele geralmente diminui à medida que a abertura numérica aumenta.

4. Qual é o seu requisito de resolução?

A resolução da objetiva do microscópio determina a menor distância de observação entre dois objetos. É diretamente proporcional ao comprimento de onda de iluminação da luz e inversamente proporcional à AN.

Quanto mais alta é a AN, menor é a distância entre dois objetos. Conforme indicado anteriormente, a escolha de uma AN certa para a sua aplicação é fundamental na determinação da resolução do seu sistema de microscópio.

5. Qual é a distância de trabalho que você precisa?

A distância de trabalho (DT) é a distância entre a lente frontal da objetiva e a superfície mais próxima da lamela quando o espécime está focado. A DT é inversamente proporcional à AN, o que significa que as objetivas com maior AN geralmente possuem distâncias de trabalho pequenas.

Se a sua aplicação necessitar de aplicações sem lamela que requerem uma distância aumentada entre o plano focal e a ponta da objetiva (ou seja, amostras com topografia irregular, estruturas delicadas ou restrições mecânicas do conjunto óptico geral), talvez as objetivas de longa distância de trabalho LMPLFLN ou SLMPLN da Olympus sejam adequadas para a sua aplicação.

6. Se você possui uma amostra de fluorescência, quão brilhante é o seu sinal de fluorescência?

Se você trabalha com amostras que emitem um sinal de fluorescência fraco, recomendamos objetivas com alta AN, pois elas absorvem mais luz. A Olympus tem uma ampla variedade de objetivas de microscópio que oferecem excitação de fluorescência desde ultravioleta (UV) a infravermelho próximo (NIR).

7. Você está usando formação de imagem de fluorescência multicanal ou de um canal?

Para compensar a correção cromática, você pode usar diferentes tipos de objetiva: acromática, semiapocromática ou apocromática. As objetivas acromáticas fornecem a menor quantidade de correção, as objetivas semiapocromáticas (ou fluorites) possuem correções esféricas adicionais e as objetivas apocromáticas oferecem a maior correção cromática.

Se a sua aplicação necessitar de fluorescência multicanal, recomendamos as objetivas apocromáticas estendidas UPLXAPO da Olympus.

8. Qual é o seu método de observação?

Ao tratar de amostras que são muito espessas, muito finas ou birrefringentes, os pesquisadores aplicarão métodos de observação diferentes de campo claro. Técnicas comuns são campo escuro, contraste de interferência diferencial (DIC), contraste de fase e polarização. A Olympus oferece objetivas dedicadas associadas a esses métodos de observação diferentes.

9. Em qual meio se encontra a sua amostra?

Muitas objetivas de microscópio são desenvolvidas para formar imagens de espécimes com ar como meio, ao passo que outras usam um meio de imersão que contém um índice de refração superior para permitir AN e resolução altas.

Por exemplo, usar óleo de imersão em vez de ar como meio de formação de imagem pode aumentar a resolução em um fator de aproximadamente 1,5. Os meios de imersão mais comuns são ar, água, óleo e silicone. Escolher a objetiva adequada para o seu meio resultará em melhor qualidade de imagem.

10. Você está usando um sistema de microscópio avançado?

A Olympus oferece objetivas dedicadas para sistemas ópticos avançados, como microscopia confocal, confocal de disco giratório, excitação multifótons e fluorescência de reflexão interna total (TIRF). Se você trabalha com estes sistemas, é fundamental escolher a objetiva certa para a sua aplicação.