Monitoramento da formação de esferoides em placas multipoços com fundo em U usando um sistema de monitoramento de incubação

Delineamento experimental

Esferoides são agregados celulares tridimensionais desenvolvidos para mimetizar características de tecido in vivo, fazendo deles um recurso valioso para diversas avaliações, como o teste do potencial de diferenciação de células-tronco ou da eficácia de fármacos. O processo de formação de esferoides costuma usar placas com fundo em U. A condução deste experimento teve como objetivo avaliar os benefícios do sistema de monitoramento de incubação Olympus Provi™ CM20 para o monitoramento da formação de esferoides em placas com fundo em U.

Procedimento experimental

Semeou-se células-tronco neurais de camundongo em uma placa de 96 poços com fundo em U (Sumitomo Bakelite, N.º de cat. MS-9096U) a uma densidade de 2.500 células/0,1 ml/poço usando o meio Knock Out DMEM/F-12 suplementado com B27 1x, GlutaMax 1x, fator de crescimento fibroblástico básico (Basic fibroblast growth factor, bFGF) a 20 ng/ml, fator de crescimento epidérmico (Epidermal growth factor, EGF) a 10 ng/ml, heparina a 0,0002% e solução de penicilina/estreptomicina a 1%.

A placa de 96 poços preparada foi inserida no sistema de monitoramento de incubação Provi CM20. A fim de monitorar a formação de esferoides, posição do foco foi definida manualmente e as imagens das células foram obtidas automaticamente a cada hora pelo sistema CM20 durante um período de 60 horas.

Resultados

Figura 1. Formação de esferoide em células-tronco neurais de camundongo

Após a avaliação das imagens adquiridas, concluiu-se que as células se agregaram rapidamente após a semeadura e se transformaram em esferoides após aproximadamente 10 horas, com posterior aumento gradual do tamanho.

Benefícios da avaliação de cultura de células com o sistema CM20

A formação de imagem com o sistema Provi CM20 foi realizada com sucesso usando placas com fundo em U. Uma das principais vantagens desse método é que as células permaneceram intactas na incubadora, reduzindo o impacto do processo de formação de imagem sobre a formação de esferoides. Esse experimento demonstra que só é necessário definir o foco uma vez com o sistema CM20, sendo possível mantê-lo por vários dias mesmo para objetos em suspensão. Com base nesses resultados, é possível concluir sobre a total viabilidade do sistema Provi CM20 para a realização de análises de lapso temporal com alta produtividade operacional usando placas de 96 poços com fundo em U. Isso é algo especialmente útil para a triagem de fármacos em modelos esferoides de tumor. Também é possível preconizar a viabilidade do uso do sistema CM20 para monitorar a diferenciação de células-tronco (p. ex., células-tronco neurais) ou de corpos embrioides, e planejamos testar esse método nessas aplicações em experimentos futuros.

Agradecimentos

Esta nota de aplicação foi preparada com a ajuda do seguinte pesquisador:
Takahiro Yamaguchi, PhD, Pesquisador Principal da ACEL, Inc.

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