Imagem de alta resolução de interações de células ósseas usando o microscópio confocal FLUOVIEW FV3000 e uma objetiva de imersão em óleo X Line 40X

O osso remodela-se constantemente usando um equilíbrio entre reabsorção óssea osteoclástica e formação óssea osteoblástica. No entanto, certos fatores de saúde podem causar um desequilíbrio, ocasionando ossos quebradiços em doenças ósseas, como a osteoporose. Para entender o mecanismo de remodelação óssea, é importante observar as interações entre osteoclastos e osteoblastos.

Neste estudo, preparamos uma seção tibial de rato (Figura 1) e observamos de perto os osteoclastos e osteoblastos na zona de fronteira entre a medula óssea e o osso cortical. Essa aplicação normalmente requer o uso de uma objetiva de baixa ampliação para capturar um amplo campo de visão para identificar uma região de interesse, seguido pelo uso de uma objetiva de imersão em óleo de alta ampliação para observar os detalhes em uma resolução mais alta. No entanto, essa abordagem pode ser difícil, pois você pode perder a região de interesse ao mudar de objetiva.

Aqui, encontramos a região de interesse em um amplo campo de visão e observamos as estruturas finas em alta resolução usando apenas uma objetiva de imersão em óleo 40X sem mudar de objetiva.

Figura 1: Seção tibial

Imagem de alta resolução de interações de células ósseas usando uma objetiva de imersão em óleo da X Line 40X (UPLXAPO40XO)

Observamos a zona limítrofe entre a medula óssea e o osso cortical em uma seção tibial de rato, bem como o contato local (*na Figura 2a) de osteoblastos (verde) com células endoteliais vasculares (amarelo) e local de interação (# na Figura 2a) de osteoblastos com osteoclastos (vermelho). O amplo campo de visão da objetiva em óleo 40X nos permitiu adquirir uma imagem que mostra onde a imagem de alta ampliação está localizada na região de interesse (imagem da Figura 2a).

Com o zoom de varredura, pudemos observar de perto o local de interação dos osteoblastos com os osteoclastos (Figura 2b). A qualidade da imagem obtida com a objetiva UPLXAPO40XO da X Line foi quase a mesma que a obtida com a objetiva convencional UPLSAPO60XO (Figura 2c).

Figura 2: Imagens fluorescentes de uma seção tibial de rato
Imagem obtida usando o zoom de varredura 1x com uma objetiva UPLXAPO40XO
Imagem obtida usando o zoom de varredura 3,45x com uma objetiva UPLXAPO40XO
Imagem obtida com o zoom de varredura de 2,03x com uma objetiva UPLSAPO60XO

Condições de imagem
Microscópio: sistema FV3000
Objetiva: UPLXAPO40XO (UPLSAPO60XO usada para referência)
Lasers: 488 nm (Alexa Fluor 488, verde), 561 nm (Alexa Fluor 568, vermelho), 640 nm (Alexa Fluor 647, amarelo)

Como o microscópio confocal FV3000 facilitou nossa experiência

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Comentário da Dra. Yukiko Kuroda

Agradecimentos
Esta nota de aplicação foi preparada com a ajuda do Dra. Yukiko Kuroda. Ela é instrutora da Keio University e é responsável pelas imagens deste estudo