넓은 시야에 걸친 높은 현지화 정밀도를 위한 ASTER 기술

SAFe 나노스코프는 조정 가능한 여기 영역의 적응형 스캐닝(ASTER) 기술을 기반으로 하는 동일한 고유 여기 시스템을 모두 공유합니다.¹ ASTER는 TIRF, HiLo 및 EPI 모드에서 균일한 조명을 생성하는 동시에 150 x 150 µm의 시야(FOV)에서 3D로 10–15 nm²에 이르는 현지화 정밀도로 지닌 PALM, STORM 또는 PAINT와 같은 SMLM 양식을 수행합니다.

ASTER의 개략도 및 그에 따른 조명 패턴.

ASTER 조명 방법은 SMLM 및 TIRF 이미징을 위해 sCMOS 카메라의 전체 FOV를 활용하는 새로운 기능을 제공합니다.

ASTER는 두 개의 갈바노미터 거울을 사용하여 표본이 위치한 면에서 조명을 제어합니다.후면 초점면(BFP)에서 여기 빔이 위치를 유지하는 동안 검류계의 각도 회전은 표본이 위치한 면의 다른 위치에 해당하는 BFP에서 유사 각도를 유도합니다.

ASTER는 래스터 스캐닝과 같은 특정 패턴을 적용하면서 모든 여기 모드(EPI, HiLo 및 TIRF)에 최대 150 × 150 µm²의 조정 가능한 FOV에서 균일한 여기를 제공할 수 있습니다.

_{미세소관(알파-튜불린 항체) CF660, 미토콘드리아(항-TOMM20) CF680 및 염색질(EdU) AF647이 염색된 U2OS 세포.스펙트럼 디믹싱이 있는 동시 다색 2D dSTORM.}

스펙트럼 디믹싱: 단일 레이저, 단일 버퍼, 단일 획득을 사용한 다색 이미징

3D 나노스코피는 전례 없는 해상도를 달성하여 형광 현미경 분야에서 혁명을 일으켰지만 SMLM의 다색 이미징은 여전히 도전 과제로 남아있습니다.도전 과제는 색수차, 버퍼 선택 및 단일 분자 호환 염료 선택을 포함한 여러 요인으로 인해 발생합니다.

이러한 문제를 해결하기 위해 Abbelight는 SMLM을 위한 스펙트럼 디믹싱을 구현했습니다.스펙트럼 디믹싱은 다이크로익 큐브와 비율계량 알고리즘을 사용하여 원적외선 염료를 분리하여 SMLM에서 동시 다색 이미징을 수월하게 수행합니다.

참고 문헌

SMLM 데이터 분석을 위한 강력한 소프트웨어

픽셀 기반 이미지를 생성하는 표준 형광 현미경과 달리 SMLM은 수백만 개의 지역화 및 관련 불확실성이 있는 포인트 클라우드를 생성합니다.Abbelight의 NEO 소프트웨어는 이 데이터를 사용자 친화적인 패키지로 변환하여 데이터 획득을 단순화하고 실시간 이미지 재구성 및 정량적 피드백을 제공합니다.

NEO 소프트웨어는 또한 SMLM 데이터를 처리하여 국소화된 단일 분자의 공간적 및 시간적 분포를 연구하는 강력한 툴을 제공합니다.이는 DBSCAN, Voronoi 및 CBC 또는 단일 입자 추적 알고리즘과 같은 공존 알고리즘을 사용하는 클러스터 분석을 포함합니다.

가능한　시스템

시스템 호환성