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NIR 지원 컨포컬 현미경으로 더 많은 정보 발견

시스템의 향상된 기술은 하나의 이미지에서 더 많은 정보를 발견할 수 있도록 확장된 멀티플렉싱을 제공했습니다.

NIR 이미징은 FV4000 시스템의 여기(λ_Ex) 및 검출(λ_Em) 스펙트럼 프로파일을 확장하여 더욱 우수한 멀티플렉싱 기능을 제공합니다. 따라서 중첩되는 방출 신호를 최소화하는 데 도움이 되는 염료를 추가로 사용할 수 있습니다.

  • 업데이트된 TruSpectral™ 기술과 Evident의 고감도 SilVIR™ 검출기를 사용하여 최대 6개 채널 멀티플렉싱
  • 고효율 볼륨 위상 홀로그램(VPH) 회절 격자 및 슬릿을 통해 최소 1nm 단위로 업계 최고 수준의 400nm~900nm 파장 범위 감지 가능
  • 최대 6개 채널의 광대역 또는 적색편이 검출기로 형광색소 선택지를 확대하여 손상을 최소화하고 자가형광을 최소화
  • 모듈식 레이저 결합기가 405nm~785nm 범위의 레이저 라인을 최대 10개까지 동시에 허용
     

    *2023년 3월 기준.

  • 6가지 형광색소로 표지된 헬라(HeLa) 세포
    세포 핵(DAPI, 파란색), 세포막(AF488, 녹색), 핵공(AF561, 노란색),
    미세소관(Qdot605, 자홍색), 미토콘드리아(MitoTracker DeepRed, 청록색), 액틴(AF750 팔로이딘, 회색).

효율적인 NIR 형광 이미징을 위한 고품질 광학 기기

FV4000 시스템의 광학 요소는 알루미늄이 아닌 은으로 코팅된 검류계 및 공진 스캐너를 포함하여 400nm~1300nm 범위의 높은 투과율을 갖습니다.

수상 경력에 빛나는 X Line™ 대물렌즈는 400nm~1000nm 사이의 색수차를 보정합니다. 또한 더 높은 개구수와 탁월한 평탄도를 갖췄을 뿐만 아니라 UV에서 NIR까지의 투과율이 매우 높아 멀티플렉싱 기능이 향상됩니다.

공동 국소화의 신뢰성 향상을 위해 Evident의 특수 A Line™(PLAPON60XOSC2) 오일 침지 대물렌즈(ne~1.40)는 엄격한 공동 국소화 분석을 위해 색수차를 최소화합니다.

X 시리즈

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1K 공진 스캐너를 사용하여 스티칭된 이미지를 생성하는 경우 총 77개의 4채널 XYZ 지점(11 × 7)을 16분 이내에 획득했습니다(검류계 스캐너를 사용하는 경우 2시간이 소요됨). H 라인 마우스 뇌의 관상 단면: 청록색(DAPI, 세포 핵), 녹색(YFP, 뉴런), 노란색(Cy3, 성상세포), 자홍색(AlexaFluor 750, 미세소관). 샘플 제공: Takako Kogure 및 Atsushi Miyawaki, RIKEN CBS 세포 기능 역학부.

고품질의 컨포컬 이미지를 빠르게 획득

고급 기술을 고유하게 조합하여 사용하면 기존의 레이저 스캐닝 현미경 시스템보다 더 빠르게 고품질의 이미지를 획득할 수 있습니다.

  • 고해상도 이미지를 고속으로 획득: 픽셀당 0.033µs를 지원하는 FN20의 1K × 1K 공진 스캐너와 SilVIR 검출기를 사용하면 최소한의 노이즈로 이미지를 빠르게 획득할 수 있습니다.
  • 탁월한 품질의 매크로 이미지: 뛰어난 품질의 스티칭된 매크로 이미지를 빠르게 획득하여 시간과 연구 잠재력을 극대화할 수 있습니다.

간단하고 정확한 초고해상도 이미징

전용 하드웨어 없이 FV4000 현미경을 사용하여 초고해상도 이미지를 캡처합니다.

  • A Line HR 대물렌즈와 초고해상도 소프트웨어(FV-OSR)을 사용하여 세포 내 구조를 손쉽게 관찰
  • FV-OSR은 컨포컬 조리개를 자동으로 최적화하여 고주파 성분을 감지하고 대비를 향상시켜 120nm의 해상도 획득
  • SilVIR 검출기와 실시간 처리 덕분에 이전 세대 시스템보다 8배 빠른 초고해상도 이미지 획득

컨포컬 모드 1AU(왼쪽)와 초고해상도 모드(오른쪽) 비교

두꺼운 샘플의 고해상도 3D 이미지

DAPI(청록색, 세포 핵) 및 AlexaFluor790(자홍색, i-67)로 표지된 헬라 세포 스페로이드. NIR 785nm에서는 스페로이드의 전체 볼륨에 대한 이미징이 가능했지만, 405nm 레이저에서는 표면적 세포 핵 관찰만 가능했습니다.

두꺼운 샘플을 이미징할 때 FV4000 현미경을 사용하면 고해상도 3D 이미지를 캡처할 수 있습니다.

  • SilVIR 검출기의 넓은 동적 범위와 감도를 통해 NIR의 더 긴 파장을 활용하여 깊숙이 침투
  • 멜라닌 및 헴(heme) 등의 광산란 화합물이 700nm~1500nm 사이의 빛을 덜 흡수한다는 점을 활용하여 산란 및 흡수가 더 적은 깊이 있는 이미지 획득 가능
  • FV4000의 685nm, 730nm, 785nm 다이오드 레이저 덕분에 가시 레이저에 비해 훨씬 더 깊이 있는 이미지 획득 가능
  • 높은 개구수의 실리콘 대물렌즈는 구면 수차를 최소화하고 마르지 않는 실리콘 오일로 타임랩스 이미지에 유용
  • 두꺼운 샘플에서 탁월한 3D 이미지를 얻기 위해 TruSight™ 디콘볼루션을 사용하여 전체 이미지 품질과 Z 해상도 개선
  • 특수 cellSens™ 소프트웨어 알고리즘을 사용하여 이미지 획득부터 출판까지 원활한 워크플로 실현

손상이 적은 생세포의 정확한 역학

일반적으로 형광 여기를 위해 짧은 기간 동안 더 긴 파장을 사용하는 것이 전반적인 샘플 상태에 더 유리합니다. 광독성이 적은 빛을 사용하면 더 오랜 기간 동안 이미징할 수 있으므로 생세포 이미징 실험에서 더욱 일관되고 재현 가능한 데이터를 얻을 수 있습니다.

FV4000 시스템은 685nm, 730nm, 785nm 레이저를 통해 자연스러운 타임랩스 이미징을 제공할 뿐만 아니라 초점 위치를 유지하기 위한 전용 TruFocus Red Z 드리프트 보정기도 갖추고 있습니다. 이 업그레이드된 TruFocus Red 장치는 더 넓은 범위의 파장을 지원하며 고성능 X Line™ 및 A Line™ 시리즈를 포함한 광범위한 대물렌즈와도 호환됩니다.

타임랩스 광 자극: C2C12 세포에서 레이저 손상이 수행되었습니다. 녹색 의사색상은 FM 1-43 항온수조가 적용되었음을 나타냅니다. 이미지는 2μs galvo 스캐너와 UPLSAPO60XOHR 대물렌즈를 사용하여 획득했습니다. 광손상에는 405 nm 레이저가 사용되었고 이미징에는 488nm 레이저가 사용되었습니다. 샘플 제공: Daniel Bittel 및 Jyoti Jaiswal, Children’s National Research Institute의 의학유전연구 센터(Center for Genetic Medicine Research).

Hoechst33342(핵, 파란색), MitoTracker Green(미토콘드리아, 녹색), LysoTracker Red(리소좀, 노란색), SiR-Tubulin(튜불린, 자홍색), POR-SA-Halo(ER, 청록색)으로 염색된 헬라 세포의 타임랩스 이미지. Hoechst33342: Ex 405nm/Em, MitoTracker Green: LysoTrakcer Red: SiR-Tubulin: POR-SA-Halo: 샘플 제공: Masayasu Taki, Ph.D., 일본 나고야 대학(Nagoya University)의 Institute of Transformative Bio-Molecules(WPI-ITbM), Yuichi Asada 및 Ryusei Aruga, 일본 나고야 대학(Nagoya University) 대학원 이학부.

MitoTracker Red(미토콘드리아, 자홍색), POR-SA-Halo(ER, 청록색)으로 염색된 타임랩스 이미지(17시간 촬영). MitoTracker Red: Ex 561nm/Em, POR-SA-Halo: Ex 730nm/Em, 샘플 제공: Masayasu Taki, Ph.D., 일본 나고야 대학(Nagoya University)의 Institute of Transformative Bio-Molecules(WPI-ITbM), Yuichi Asada 및 Ryusei Aruga, 일본 나고야 대학(Nagoya University) 대학원 이학부.

선명한 심부 이미지

FV4000 현미경과 함께 Evident의 실리콘 침지 대물렌즈를 사용하면 샘플 내부의 특징과 심부 구조에 대한 선명한 이미지를 얻을 수 있습니다. 실리콘 오일의 굴절률은 생세포나 조직의 굴절률과 유사해 공기, 물, 기타 오일에 비해 구면 수차가 크게 줄어듭니다. 수차가 적기 때문에 샘플의 심부에서 더 선명한 이미지를 얻을 수 있습니다. 그리고 실리콘 침지 오일은 37℃(98.6°F)에서도 마르지 않아 장시간의 타임랩스 이미징에 효과적입니다.

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