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TIRF Imaging
TIRF Objectives and IXplore TIRF

TIRF용 고해상도 대물 렌즈

높은 개구수(NA)는 TIRF 현미경에 중요합니다. TIRF 현미경의 개척자인 Olympus는 1.45에서 세계 최고의 1.7*에 이르는 높은 개구수와 60x-150x 배율의 다양한 대물 렌즈 라인업을 갖추고 있습니다. 초고해상도 및 sCMOS 카메라 사용 대규모 시야의 캡처링 이미지 같은 최신 관찰 방법에는 최고 품질의 대물 렌즈가 요구됩니다. 이에 따라 당사는 첨단 대물 렌즈 제조 기술을 개발하였습니다. 이러한 첨단 연마 기술을 이용하여 개구수가 1.5*인 세계 최초의 보정된 Plan 아포크로맷 대물 렌즈를 만들었습니다. 이 대물 렌즈는 큰 시야에서도 균일한 이미지 품질을 제공하며 TIRF 이미징에 이상적입니다.

*1 2018년 11월 기준. Olympus 연구에 따름.
*2 2018년 11월 기준. Olympus 연구에 따름.

전반사 형광(TIRF) 대물 렌즈

원형질막과 FBP17 막 결합 단백질 간 중합 및 해중합의 타임 랩스 TIRF 이미징 Part 1.

 높은 개구수로 높은 신호-노이즈 비율을 얻기 위해 투과 깊이를 조정하였습니다. 

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원형질막과 FBP17 막 결합 단백질 간 중합 및 해중합의 타임 랩스 TIRF 이미징 Part 2.

연구원들은 원형질막으로의 FBP17 동원이 미오신 기반 수축력에 의해 야기된 막인장의 과도 감소에 달려 있는지 여부를 조사하였습니다. 미오신 억제제 블레비스타틴의 처리 후 FBP17이 세포 가장자리에서 갑자기 사라졌습니다(175초). 이미지는 UAPON100XOTIRF*4를 사용하여 획득되었습니다.
*4 UPLAP0100XOHR의 이전 모델

이미지 데이터 제공: Kazuya Tsujita, Ph.D., Toshiki Itoh, Ph.D., 고베 대학 첨단과학기술조직 생체신호연구센터 참고문헌: Nat Cell Biol. 2015 Jun; 17 (6): 749–58. doi: 10.1038/ ncb3162.

TIRF 대물 렌즈에 대해 자세히 알아보기

막경유 이온 채널 복합체(APON100XHOTIRF)의 아단위를 계수하는 단일 분자 형광 이미징 Part 1.

이 대물 렌즈를 사용하면 1.70의 개구수 덕분에 더 높은 해상도와 더 밝은 이미지의 단일 분자 TIRF 이미징이 가능합니다.

아단위 계수*5 기법은 하나의 Kv4.2–DPP10 복합체의 막경유 이온 채널 Kv4.2에 결합되는 부속 디펩티딜펩티드가수분해효소 같은 단백질 10(DPP10)의 수를 분석하는 데 사용되었습니다. APON100XHOTIRF 대물 렌즈의 높은 개구수를 통해 연구원들은 단일 분자의 광퇴색으로 야기된 형광 강도 변화를 측정할 수 있습니다. 본 연구*6는 DPP10 아단위의 최대 4개 분자가 이온 채널 Kv4.2와 함께 복합체를 형성하는 것을 밝혔습니다.

*5 Ulbrich, MH 및 Isacoff EY. “Subunit counting in membrane–bound proteins.” Nature Methods, 4 (2007): 319–321.
*6 Kitazawa M, Kubo Y, and Nakajo K. “Kv4.2 and accessory dipeptidyl peptidase–like protein 10 (DPP10) subunit preferentially form a 4:2 (Kv4.2:DPP10) channel complex.” J Biol Chem, 290 (2015): 22724–22733.

TIRF 대물 렌즈에 대해 자세히 알아보기

단일 분자 형광 이미징을 사용한 막경유 이온 채널 복합체의 아단위 계수의 개략 예시도

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막경유 이온 채널 복합체(APON100XHOTIRF)의 아단위를 계수하는 단일 분자 형광 이미징 Part 2.

최초 5초 후 mCherry의 여기에 의해 Kv4.2–mCherry의 편재화가 시각화되고, 뒤이어 다음 10초 후 mEGFP의 여기에 의해 편재화 및 연속 형광 광퇴색이 시각화됩니다. 두 개의 형광 분자가 공동 국소화하는(흰색 화살촉으로 표시됨) 각 스폿의 형광 강도를 그래프로 나타내어 최대 4단계에 mEGFP의 광퇴색이 있는 스폿이 발견되었습니다. 따라서, mEGFP–DPP10의 최대 4개 분자가 Kv4.2 이온 채널 복합체에 결합되어 있는 것이 확인되었습니다.

이미지 데이터 제공: Masahiro Kitazawa, Ph.D., Yoshihiro Kubo, M.D.,Ph.D., Koichi Nakajo*, Ph.D., 국립생리과학연구소 분자생리학부 생물물리학 및 신경물리학과
*현주소: 오사카 의과대학 생리학과

TIRF 대물 렌즈에 대한 선택 가이드

작동 거리
(mm)
배율 대물 렌즈 시야수*3 개구수 덮개 유리 이멀젼
UPLAPO60XOHR 0.11 60X 22 1.50 0.13-0.19 오일
UPLAPO100XOHR 0.12 100X 22 1.50 0.13-0.19 오일
APON100XHOTIRF 0.08 100X 22 1.70 0.15 특수 오일
UAPON150XOTIRF 0.08 150X 22 1.45 0.13-0.19 오일

*3 접안렌즈를 통해 식별 가능한 최대 시야수

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