인큐베이션 모니터링 시스템을 사용하여 U자형 바닥 멀티웰 플레이트 내 스페로이드 형성 모니터링

실험 개요

스페로이드는 생체 내 조직의 기능을 모방하도록 설계된 3D 세포 군집체로, 줄기세포의 분화 가능성 또는 약물 효능 테스트와 같은 다양한 평가에 유용합니다.U자형 바닥 플레이트는 종종 스페로이드 형성에 사용됩니다.이 실험은 Olympus Provi™ CM20 인큐베이션 모니터링 시스템을 통한 U-바닥 플레이트 내 스페로이드 형성 모니터링의 이점을 평가하기 위해 수행되었습니다.

실험 과정

마우스 신경 줄기세포를 96웰 U자형 바닥 플레이트(Sumitomo Bakelite, Cat.No.MS-9096U)에 시딩하였으며 밀도는 2,500 세포/0.1 mL/웰에 1x B27, 1x GlutaMax, 20ng/mL bFGF, 10ng/mL EGF, 0.0002% 헤파린, 1% 페니실린-스트렙토마이신이 첨가된 Knock Out DMEM/F-12를 사용했습니다.

준비된 96웰 플레이트는 Provi CM20 인큐베이션 모니터링 시스템에 배치되었습니다.초점 위치는 수동으로 설정하였으며 스페로이드 형성을 모니터링하기 위해 60시간 동안 CM20 시스템으로 매시간 세포를 자동으로 이미지화하였습니다.

결과

그림 1.마우스 신경 줄기세포에서 스페로이드 형성

획득한 이미지를 평가하여 파종 후 세포가 빠르게 모여 약 10시간 이내에 스페로이드가 된 다음 점차 그 크기가 증가한다는 결론을 내릴 수 있었습니다.

CM20 시스템을 사용한 세포 배양 평가의 이점

Provi CM20 시스템으로 한 이미징은 U자형 바닥 플레이트를 사용해 성공적으로 수행되었습니다.이 방법의 주요 이점은 인큐베이터에서 세포를 건드리지 않고도 유지할 수 있어서 이미징 프로세스가 스페로이드 형성에 미치는 영향을 완화할 수 있다는 것입니다.이 실험은 또한 CM20에서 초점 위치를 한 번만 설정하면, 부유형 개체여도 초점이 며칠 동안 유지되는 것을 보여줍니다.이러한 결과를 바탕으로 U자형 바닥 96웰 플레이트를 사용하여 고처리량 타임 랩스 분석을 수행하기 위해 Provi CM20 시스템을 사용할 수 있다는 결론을 내릴 수 있습니다.이는 스페로이드 종양 모델의 약물 스크리닝에 특히 유용합니다.또한, CM20 시스템을 줄기세포(예: 신경 줄기세포) 또는 배아체(EB)의 분화 모니터링에 사용할 수 있다고 보아 향후 실험에서 이러한 응용 분야에 본 방법을 테스트할 예정입니다.

감사의 글

이 애플리케이션 노트는 다음 연구원의 도움을 받아 작성되었습니다.
Takahiro Yamaguchi, PhD, ACEL, Inc.의 수석 연구원

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