약효의 평가–공동 배양된 스페로이드의 약제에 대한 반응

시스템의 사용과 결합된 컨포칼 현미경 관찰을 통해 적절한 형광 염료로 착색된 공동 배양 스페로이드의 약효를 평가할 수 있습니다.

목적

항암제의 효능 분석의 대부분은 2D 단분자층으로 생장한 고정화 세포의 사용에 의존하였습니다. 하지만 이러한 2D 단분자층은 3D 구조로 되어 있는 암세포의 복합적 고유 환경을 재현할 수 없습니다. 따라서 스페로이드 같은 3D 세포 배양이 주목을 끌고 있습니다. 또한 두 개 이상의 세포 유형으로 구성된 공동 배양 스페로이드 시스템은 세포내 상호작용 또는 세포 활성화 메커니즘의 연구에 유용한 것이 입증되었습니다. 본 연구에서는 시스템을 사용한 형광 이미지 분석을 통해 U20S 및 HT-29으로 구성된 공동 배양 스페로이드에 미치는 클로로퀸(CHL)의 영향을 조사하였습니다.

샘플 제공

유전자 이식 U20S 및 HT-29 발현 YFP가 포함된 세포 현탁액을 50개 유전자 이식 U20S 세포/웰 및 450개 HT-29 세포/웰로 PrimeSurface® 96U plate(SUMITOMO BAKELITE CO., LTD)에 파종하였습니다. 세포 배양 시작 48시간 후 각 웰에 연속 희석된 CHL을 추가하였습니다. CHL의 추가 48시간 후 각 웰에 Hoechst 33342(핵 염색 염료) 및 프로피듐 요오드화물(PI: 죽은 세포 염색 염료)을 추가하였습니다. YFP
형광의 관찰을 통해 U20S와 HT-29가 구별될 수 있습니다.

결론
형광 이미지의 획득 및 분석

상기 스페로이드의 형광 이미지를 획득하였습니다. 그림에 표시된 바와 같이 공동 배양 스페로이드들은 농도의 증가 시 3D 구조에서 3D 구조적 온전함을 상실하였습니다. HT-29 세포가 완전히 산재된 반면에 U20S 세포(가짜 녹색) 집합 상태가 유지된 것이 흥미롭습니다. 또한 CHL 농도 증가 시 각 웰에 죽은 세포(가짜 빨간색) 대 모든 세포(가짜 파란색) 비율이 증가하였습니다. 분석 소프트웨어로 핵의 식별 및 계산 결과를 사용하여 CHL 농도 대비 비율을 그래프로 표시할 수 있습니다. 이러한 결과는 하나의 마이크로플레이트 내 공동 배양 스페로이드를 사용하여 약효를 쉽게 평가할 수 있음을 나타냅니다.

PrimeSurface는 Sumitomo Bakelite Co., Ltd의 등록 상표입니다.
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