약효의 평가–스페로이드 크기의 정량적 평가

시스템을 사용한 명시야상 분석에 따라 스페로이드의 횡단면 영역의 정량화를 통해 항암제 5-FU의 효능을 평가하였습니다.

목적

최근에 3D 종양 스페로이드가 고형 종양의 체외 모델로 유용한 것으로 간주되었습니다. 항암제 치료로 유도된 3D 스페로이드의 크기 변화는 세포 증식을 억제하는 기능과 높게 관련된 지표입니다. 시스템과 결합한 현미경을 사용하여 스페로이드 변화의 명시야상 분석을 통해 항암제의 효능을 정량적으로 및 효율적으로 평가할 수 있습니다. 본 연구에서는 5-FU로 유도된 HT-29 3D 스페로이드의 크기 변화를 정량적으로 평가하였습니다.

샘플 제공

스페로이드를 준비하기 위해 HT-29의 세포 현탁액을 750개 세포/웰로 PrimeSurface® 96U plate(SUMITOMO BAKELITE CO., LTD)에 파종하였습니다. 세포 배양의 시작으로부터 4일 후 5-FU를 3D 스페로이드에 추가하였으며 4일간 더 배양을 계속하였습니다. 동일한 조건에서 세포 부착성 마이크로플레이트에 HT-29 2D 단분자층을 준비하고 뒤이어 2D 단분자층에 5-FU를 추가하였습니다.

결론
HT-29로 구성된 3D-스페로이드 또는 2D-단분자층의 이미지의 획득 및 분석

시스템을 사용하여 HT-29 3D 스페로이드가 포함된 마이크로플레이트의 명시야 이미지를 획득하였습니다(그림 1). 하나의 스페로이드에 대해 적도면이 포함된 여러 이미지를 획득하였습니다. 뒤이어 각기 5-FU의 농도로 평균 강도 투사 및 통계 분석을 수행하였습니다. 5-FU의 농도 증가 시 HT-29 3D 스페로이드의 횡단면 영역이 감소하였습니다. 이는 5-FU 가 스페로이드 내 세포 증식을 억제하는 것을 나타냅니다(그림 2). Hoechst 33342로 착색된 HT-29 2D 단분자층에 대해, 시스템으로 획득된 형광 이미지에 따라 부착 영역을 계산하였습니다. 5-FU 의 농도 증가 시 HT-29 2D 단분자층의 부착 영역이 감소하였습니다(그림 2). 이러한 결과는 시스템을 통해 3D 스페로이드 및 2D 단분자층의 약효를 평가할 수 있다는 것을 나타냅니다.

PrimeSurface는 Sumitomo Bakelite Co., Ltd의 등록 상표입니다.
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