보조생식기술(ART)은 불임을 해결하기 위한 수술과 치료입니다. Olympus는 보조생식기술의 다양한 연구 응용 분야를 지원하는 다음과 같은 여러 유형의 현미경을 제공합니다.

• 난자 세척, 난자 동결 및 배아 해동 관찰용 실체 현미경
• 정자 관찰용 정립 현미경
• 세포질 내 정자 주입술(ICSI) 및 정자 형태 선별 정자 주입술(IMSI) 및 스핀들 관찰의 워크플로를 지원하는 도립 현미경

이러한 작업을 위해 현미경을 적절하게 조정하면 관찰 이미지의 품질을 높일 수 있습니다. 귀하의 업무를 지원하기 위해, 본 애플리케이션 노트에서 사용자의 일상 관측 및 워크플로를 최적화하기 위한 5가지 기본 현미경 조정을 알려드리겠습니다. 아래 절차는 일반적으로 사용되는 Olympus 도립 현미경 및 실체 현미경에 초점을 두었다는 점에 유의하세요.
 

1. 광축 조정

IX73 또는 IX83 도립 현미경의 광축을 조정하려면 다음 단계를 따르세요.

1. 콘덴서의 홍채 조리개 레버를 맨 왼쪽으로 움직여 조리개를 엽니다.
2. 조명 기둥의 시야 조리개 레버를 맨 왼쪽으로 움직여 조리개를 엽니다.
3. 10배율 대물렌즈를 사용하여 샘플에 초점을 맞춥니다.
4. 시야 조리개 레버를 오른쪽으로 약간 움직여 이미지가 시야에 들어오도록 홍채 조리개를 조입니다. (그림 2a는 접안렌즈를 통한 시야를 보여줍니다.)
5. 콘덴서 손잡이를 돌려 홍채 조리개 이미지의 초점을 위아래로 움직입니다.
   다각형이 선명하게 보이는지 확인하세요(그림 2b).
6. 첨부된 육각 나사 드라이버 두 개를 조정 나사 구멍에 삽입합니다. 콘덴서의 중앙 나사를 돌려 관측 시야의 중앙으로 움직입니다(그림 2c).
7. 이미지가 관측 시야에서 사라질 때까지 홍채 조리개 레버를 열어줍니다.

3차원 방식으로 Matrigel에서 분화되어 성장한 간 오가노이드의 배양 과정을 CM20 시스템으로 관찰할 수 있는지 시험했습니다.^*1

그림 1: IX2-MLWCD 수동 콘덴서를 갖춘 IX73 현미경

2. 동공 거리 조정

동공 거리 조정 기능은 선명한 관찰을 위해 접안렌즈 사이의 너비를 관찰자 눈 사이의 너비로 수정합니다. 동공 거리를 적절하게 조정하면 접안렌즈를 통해 하나의 선명한 이미지를 볼 수 있습니다. 만약 접안렌즈를 통해 두 가지 이미지를 보는 경우, 동공 거리를 반드시 조정해야 합니다.

IX73 또는 IX83 도립 현미경이나 SZX10 또는 SZX16 실체 현미경의 동공 거리를 조정하려면 다음 단계를 따르세요:

1. 눈은 샘플에 집중하면서 올바른 안점 위치에서 접안렌즈를 들여다봅니다(그림 3). 편안하게 관찰하기 위해서는 접안렌즈와 눈 사이에 일정 거리를 두어야 합니다. 안경을 쓰는 경우, 안경이 접안렌즈의 유리에 닿게 하세요. 육안인 경우, 접안렌즈에 부착된 고무 세안 컵에 눈을 대세요.

   
   그림 3

2. 왼쪽과 오른쪽 접안렌즈의 사이의 너비를 가로로 넓히거나 좁혀 왼쪽과 오른쪽 관측 시야가 중앙에서 단일 이미지로 나타나도록 합니다. 단일 이미지를 응시하면서 눈을 접안렌즈에 가깝게 이동합니다. 오른쪽 눈, 왼쪽 눈 그리고 양쪽 눈에서 같은 관측 시야를 볼 수 있게 조정을 반복합니다.

   
   그림 4

3. 디옵터 조정

디옵터 조정은 왼쪽과 오른쪽 관측 시야의 차이를 교정하고 대물렌즈 전환으로 인한 초점 이동을 최소화합니다. 디옵터는 개인마다 다르기 때문에, 각 사용자에게 맞게 조정해야 합니다.

IX73 또는 IX83 도립 현미경의 디옵터를 조정하려면 다음 단계를 따르세요.

1. 양쪽 디옵터 조정 고리의 눈금을 “0” 위치에 맞춥니다.

   
   그림 5

2. 광 경로에 저배율 대물렌즈(예: 10배율)를 삽입합니다. 오른쪽 눈으로 오른쪽 접안렌즈를 들여다보고 조동 동축 손잡이로 샘플에 초점을 맞춥니다.
3. 저배율 대물렌즈(예: 10배율)를 다시 광 경로에 삽입합니다. 오른쪽 눈으로 샘플을 보면서 오른쪽의 디옵터 조정 고리(관측관 측면: 그림 6a의 톱니 모양 부분)만 돌려 샘플에 초점을 맞춥니다.

   
   그림 6

4. 왼쪽 눈으로 왼쪽 접안레즈를 들여다보고 왼쪽 디옵터 조정 고리(접안렌즈 측면)만(그림 6b) 돌려 샘플에 초점을 맞춥니다.

4. 대물렌즈 보정환 조정

샘플 용기의 바닥면으로 인해 관찰 이미지에서 구면수차(광축의 한 지점으로 빛이 모이지 않는 광학 오류)가 발생할 수 있습니다. 이로 인해 이미지가 선명하게 보이지 않을 수 있습니다. 대물렌즈의 보정환은 이러한 수차를 줄여줍니다.

그림 7

Olympus 대물렌즈는 일반적인 커버 슬립 두께인 1.5mm의 용기로 광학적으로 설계되었습니다. 대물렌즈의 보정환을 1.5로 고정했을 때 열판과 용기의 총 바닥 두께가 1.5mm가 되어야 합니다. 이러한 총 두께는 대물렌즈를 최대한 활용하기에 적합합니다.

이러한 구체적인 두께 요구사항을 충족하기 위해서는 샘플 용기에 맞는 열판을 신중하게 골라야 합니다. 1mm 두께의 플라스틱 용기에는 0.5mm 두께의 열판이 적합합니다. 0.17mm 두께의 유리 바닥 용기에는 1.3mm 두께의 열판이 적합합니다.

또한, 열판 두께 및 용기 두께의 합에 따라 대물렌즈의 보정환을 설정할 수 있습니다(IX73 도립 현미경 사용 시). 여기 두 가지 예가 있습니다.

예시 1: 열판 두께가 0.5mm이고 유리 바닥 용기가 0.17mm 두께인 경우, 두께를 합하여(0.5 + 0.17mm = 0.67mm) 보정환의 위치를 0.67mm로 조정합니다(그림 8).

그림 8

예시 2: 열판 두께가 0.5mm이고 플라스틱 용기 두께가 1mm인 경우, 두 두께를 합하여(0.5 + 1mm= 1.5mm) 보정환의 위치를 1.5mm로 조정합니다(그림 9).

그림 9

5. 줌 공초점 조정

줌 공초점 조정은 저배율과 고배율 사이를 전환할 때 초점이 맞지 않는 문제를 방지합니다. 이를 적절하게 조정하면, 난자 세척과 같은 작업 중 배율을 전환할 때 매번 초점을 맞출 필요가 없습니다. 이는 작업 효율성을 높일 수 있습니다.

SZX10 또는 SZX16 실체 현미경의 줌 초점을 조정하려면, 다음 단계를 따르세요.

1. 줌 손잡이를 최저 배율로 설정하고 조동 동축 손잡이로 초점을 맞춥니다.
2. 줌 손잡이를 고배율 쪽으로 조금씩 움직이면서 미동 동축 손잡이로 초점을 맞춥니다. 그다음, 줌 손잡이를 최고 배율로 움직여 초점을 맞춥니다.
3. 줌 손잡이를 다시 저배율 쪽으로 움직입니다. 시야가 초점을 벗어나는 경우, 왼쪽 및 오른쪽 접안렌즈의 디옵터 조정 고리를 돌려 초점을 맞춥니다.
4. 다시 줌 손잡이를 최고 배율로 설정하고 초점이 맞는지 확인합니다. 초점을 벗어나는 경우, 2단계 및 3단계를 반복합니다. 저배율 및 고배율 양쪽의 초점이 맞으면 줌 초점 조정을 종료합니다.
5. 양쪽 눈이 단일 관측 시야를 볼 수 있도록 눈 너비를 조정합니다.

   
   그림 10