Systèmes Abbelight SAFe
Technologie ASTER pour des localisations d’une très grande précision sur un grand champ de visionLes nanoscopes SAFe partagent tous le même système d’excitation unique basé sur la technologie ASTER (Adaptable Scanning for Tunable Excitation Regions, ASTER, balayage adaptable pour des régions d’excitation ajustables)1. La technologie ASTER génère un éclairage homogène en modes TIRF, Hilo et EPI tout en permettant la mise en œuvre des modalités SMLM telles que PALM, STORM ou PAINT avec des localisations d’une précision atteignant 10–15 nm en 3D sur un champ de vision de 150 x 150 µm2. |
Schéma de l’ASTER et motifs d’éclairage résultants | La méthode d’éclairage ASTER offre une nouvelle capacité d’exploiter l’ensemble du champ de vision des caméras sCMOS pour l’imagerie SMLM et TIRF. L’ASTER utilise deux miroirs galvanométriques pour contrôler l’éclairage au niveau du plan de l’échantillon. Tandis que le faisceau d’excitation conserve sa position dans le plan focal arrière (PFA), la rotation angulaire d’un galvanomètre induit un angle similaire dans le PFA correspondant à une position différente dans le plan de l’échantillon. En appliquant des motifs spécifiques, tels que le balayage ligne par ligne, l’ASTER peut assurer une excitation uniforme sur des champs de vision ajustables allant jusqu’à 150 × 150 µm2 pour tous les modes d’excitation (EPI, Hilo et TIRF). |
Imagerie TIRF à grand champ de vision avec éclairage homogèneOlympus est une entreprise pionnière dans le domaine de la microscopie TIRF, et sa gamme d’objectifs TIRF est conçue pour assurer un contrôle rigoureux de l’onde évanescente produite en imagerie TIRF avec un grossissement allant de 60 à 150X. L’objectif APON100XHOTIRF possède une ouverture numérique de 1,7*, soit la plus grande au monde, tandis que les objectifs UPLAPO60XOHR et UPLAPO100XOHR sont les premiers objectifs planapochromatiques au monde à posséder une ouverture numérique de 1,5*. Grâce aux objectifs d’Olympus et à la technologie d’éclairage ASTER d’Abbelight, il est possible d’obtenir un éclairage TIRF homogène sur un grand champ de vision. * Information valable en date de novembre 2018. Selon les recherches d’Olympus. |  Image de neurones hippocampiques en culture marqués pour le cytosquelette de spectrine et prise en mode de microscopie TIRF. La technologie Abbelight ASTER a permis d’obtenir une TIRF homogène sur l’ensemble du champ de vision d’une caméra à capteur sCMOS Fusion d’Hamamatsu (plus grande que la taille du port pour caméra). Échantillon gracieusement fourni par C. Leterrier, NeuroCytoLab, Marseille, et images reproduites avec l’aimable autorisation d’Adrien Mau, ISMO, Orsay. |
 Cellules U2OS marquées pour les microtubules (anticorps antialpha-tubuline) CF660, les mitochondries (anti-TOMM20) CF680 et la chromatine (EDU) AF647. dSTORM 2D multicolore simultanée avec démixage spectral. | Démixage spectral : imagerie multicolore avec un laser, un tampon et une acquisitionBien que la nanoscopie 3D ait révolutionné le domaine de la microscopie de fluorescence en atteignant des résolutions sans précédent, l’imagerie multicolore reste difficile en microscopie SMLM. Cette difficulté est due à plusieurs facteurs : aberrations chromatiques, choix des tampons et choix de fluorophores compatibles avec la détection de molécules uniques. Pour résoudre ces défis, Abbelight a mis en œuvre le démixage spectral pour la SMLM. En séparant les fluorophores émettant dans le rouge lointain à l’aide d’un cube dichroïque et d’algorithmes ratiométriques, le démixage spectral permet une imagerie multicolore simultanée efficace en SMLM. |
Références bibliographiques1 : MAU, A., FRIEDL, K., LETERRIER, C., BOURG, N., et LÉVÊQUE-FORT, S. « Fast scanned widefield scheme provides tunable and uniform illumination for optimized SMLM on large fields of view », Nature Communication, 21 mai 2020. |
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