Technologie ASTER pour des localisations d’une très grande précision sur un grand champ de vision

Les nanoscopes SAFe partagent tous le même système d’excitation unique basé sur la technologie ASTER (Adaptable Scanning for Tunable Excitation Regions, ASTER, balayage adaptable pour des régions d’excitation ajustables)¹. La technologie ASTER génère un éclairage homogène en modes TIRF, Hilo et EPI tout en permettant la mise en œuvre des modalités SMLM telles que PALM, STORM ou PAINT avec des localisations d’une précision atteignant 10–15 nm en 3D sur un champ de vision de 150 x 150 µm².

Schéma de l’ASTER et motifs d’éclairage résultants

La méthode d’éclairage ASTER offre une nouvelle capacité d’exploiter l’ensemble du champ de vision des caméras sCMOS pour l’imagerie SMLM et TIRF.

L’ASTER utilise deux miroirs galvanométriques pour contrôler l’éclairage au niveau du plan de l’échantillon. Tandis que le faisceau d’excitation conserve sa position dans le plan focal arrière (PFA), la rotation angulaire d’un galvanomètre induit un angle similaire dans le PFA correspondant à une position différente dans le plan de l’échantillon.

En appliquant des motifs spécifiques, tels que le balayage ligne par ligne, l’ASTER peut assurer une excitation uniforme sur des champs de vision ajustables allant jusqu’à 150 × 150 µm² pour tous les modes d’excitation (EPI, Hilo et TIRF).

_{Cellules U2OS marquées pour les microtubules (anticorps antialpha-tubuline) CF660, les mitochondries (anti-TOMM20) CF680 et la chromatine (EDU) AF647. dSTORM 2D multicolore simultanée avec démixage spectral.}

Démixage spectral : imagerie multicolore avec un laser, un tampon et une acquisition

Bien que la nanoscopie 3D ait révolutionné le domaine de la microscopie de fluorescence en atteignant des résolutions sans précédent, l’imagerie multicolore reste difficile en microscopie SMLM. Cette difficulté est due à plusieurs facteurs : aberrations chromatiques, choix des tampons et choix de fluorophores compatibles avec la détection de molécules uniques.

Pour résoudre ces défis, Abbelight a mis en œuvre le démixage spectral pour la SMLM. En séparant les fluorophores émettant dans le rouge lointain à l’aide d’un cube dichroïque et d’algorithmes ratiométriques, le démixage spectral permet une imagerie multicolore simultanée efficace en SMLM.

Références bibliographiques

Logiciel puissant pour l’analyse des données de SMLM

Contrairement à la microscopie de fluorescence standard, qui génère des images formées de pixels, la SMLM produit des nuages de points avec des millions de localisations et d’incertitudes associées. Le logiciel NEO d’Abbelight convertit ces données en un format convivial, simplifiant l’acquisition des données et fournissant une reconstruction des images et des informations quantitatives en temps réel.

Le logiciel NEO offre également des outils puissants pour traiter les données de SMLM afin d’étudier la distribution spatiale et temporelle des molécules individuelles localisées. Ces outils comprennent l’analyse des amas avec DBSCAN, Voronoi et des algorithmes de colocalisation comme CBC ou des algorithmes de suivi des particules.

Systèmes disponibles

Compatibilité du système