Fluorescence Microscopy
Présentation de la section :
La microscopie de fluorescence, à savoir l'éclairage par une lumière d’excitation de fluorescence et l'observation de la fluorescence émise, est la technique de microscopie qui, à ce jour, connaît le développement le plus rapide, aussi bien pour les applications médicales que les applications des sciences de la vie. La prédominance de la microscopie de fluorescence a incité au développement de microscopes plus complexes et de nombreux accessoires pour la fluorescence. L'épifluorescence, ou éclairage épiscopique, est aujourd'hui devenue la méthode standard pour de nombreuses applications et forme une bonne partie de ce tutoriel. Nous avons divisé la section Microscopie de fluorescence du manuel d’introduction en plusieurs catégories afin de faciliter l'organisation et le téléchargement. Cliquez sur les liens ci-dessous pour consulter les différents points d'intérêt relatifs à la microscopie de fluorescence.
Articles de synthèse
Présentation de la microscopie de fluorescence
Découvrez les principes de base de la fluorescence, un des processus lumineux les plus répandus au cours duquel des molécules excitées électroniquement par un mécanisme physique, mécanique ou chimique émettent de la lumière.
Microscope à fluorescence
Contrairement à d'autres techniques de microscopie optique, comme la biréfringence, qui utilisent des échantillons macroscopiques, la microscopie de fluorescence est capable d'acquérir des images d'une seule molécule grâce aux seules propriétés d'émission de la fluorescence.
Sources de lumière
Pour générer une lumière d'excitation d’intensité suffisante pour provoquer l’émission d’une fluorescence secondaire détectable, vous aurez besoin de sources de lumière puissantes comme des lampes à LED, au mercure ou à arc au xénon (brûleur).
Optimisation et résolutions des problèmes
Cet article passe en revue les propriétés essentielles de la microscopie de fluorescence comme la détection d’objets fluorescents pouvant être à peine visibles ou très lumineux par rapport au fond, ainsi que les problèmes fréquemment rencontrés en ce qui concerne la configuration des microscopes.
Détecteurs d'imagerie
Cette rubrique a pour objectif de vous aider à comprendre les principes de base de la détection de la lumière et de vous fournir un guide pour vous permettre de choisir le détecteur adapté à votre application de microscopie de fluorescence.
Présentation des fluorophores
La microscopie de fluorescence à champ large et la microscopie confocale à balayage laser permettent l’acquisition d’image de la fluorescence secondaire émise comme grâce à leur très grande sensibilité élevé.
Protéines fluorescentes Optical Highlighter
Les protéines Optical Highlighters sont peu ou pas du tout fluorescentes lors d'une excitation à la longueur d'onde d'imagerie, mais l’intensité de leur fluorescence augmente après activation par irradiation à une longueur d'onde différente.
Erreurs à éviter en microscopie de fluorescence
Apprenez-en plus sur la photomicrographie en conditions d’éclairage pour l’observation de la fluorescence. Cette technique est associée à un ensemble unique de circonstances susceptibles de poser des problèmes spécifiques au microscopiste.
Aspects pratiques des associations de filtres de fluorescence
Une large gamme de cubes de filtres est disponible auprès de la plupart des fabricants qui fabriquent maintenant des jeux de filtres pouvant être employés avec la plupart des fluorophores utilisés à ce jour.
Glossaire des termes utilisés en microscopie confocale ou de fluorescence
Les termes présentés sont fournis sous la forme d'un guide et d'un outil de référence à destination des visiteurs désireux de consulter les nombreux sujets spécialisés relatifs à la microscopie de fluorescence et la microscopie confocale à balayage laser.
Techniques de pointe utilisées en microscopie de fluorescence
Présentation de la microscopie confocale
La microscopie confocale permet de contrôler la profondeur de champ, d'éliminer du plan focal les informations provenant du fond ou de les réduire et de collecter des coupes optiques d'échantillons épais.
Microscopie à excitation multiphotonique
La microscopie de fluorescence à excitation multiphotonique est un outil puissant qui associe les techniques de la microscopie à balayage laser à l'excitation de fluorescence multiphotonique à grande longueur d'onde. Celle-ci vous permet d'acquérir des images 3D à haute résolution de vos échantillons.
Transfert d'énergie entre molécules fluorescentes (FRET)
L’application de la technique de transfert d'énergie entre molécules fluorescentes (FRET) à la microscopie optique permet de déterminer l'approche entre deux molécules à une distance de quelques nanomètres.
Microscopie de fluorescence par réflexion totale interne
La microscopie de fluorescence par réflexion totale interne (TIRFM) est généralement utilisée pour étudier les interactions entre les molécules et les surfaces, une application très importante pour de nombreuses disciplines de biologie cellulaire et moléculaire.
Systèmes laser pour microscopie optique
Les lasers utilisés en microscopie optique constituent des sources de lumière monochrome à haute intensité. Ceux-ci sont utiles dans le cadre de nombreuses techniques et, notamment, le piégeage optique, la microscopie en temps de vie de fluorescence et le recouvrement de fluorescence après photoblanchiment.
Microscopie de fluorescence et CID
La microscopie de fluorescence peut être associée à des techniques de renforcement du contraste, comme la technique d'éclairage de contraste interférentiel différentiel (CID), afin de minimiser les effets du photoblanchiment en sélectionnant une zone d'intérêt spécifique d’un échantillon par CID.
Microscopie de fluorescence et contraste de phase
Pour réduire au strict minimum le photoblanchiment, la microscopie de fluorescence peut être associée à l’éclairage du contraste de phase. L'idée est de localiser la zone d'intérêt d'un échantillon en utilisant la technique de contraste de phase puis, sans repositionner l'échantillon, de faire passer le microscope en mode fluorescence.
Galerie d'images numériques de microscopie de fluorescence
Les échantillons présentés dans cette galerie sont issus d'une multitude de disciplines différentes utilisant des fluorochromes et l'autofluorescence. Les images ont été acquises avec des caméras numériques ou des appareils photo classiques avec des films Fujichrome Provia de 35 mm.
Anatomie d'un microscope à fluorescence
Microscope droit Olympus
Découvrez le microscope droit à fluorescence Olympus équipé d'un illuminateur vertical avec tourelle de cubes de filtres et source de lumière d'excitation de fluorescence.
Microscope inversé Olympus
Les microscopes dotés d'un statif inversé (microscope inversé Olympus IX70) sont conçus pour les applications de culture tissulaire et sont capables de produire un éclairage d’excitation de fluorescence via un trajet optique direct et un trajet épiscopique.
Tutoriels interactifs Java
Trajet des rayons lumineux dans un microscope à fluorescence
Explorez le trajet des rayons lumineux dans un microscope droit. Le schéma présenté dans ce tutoriel est celui d'un microscope droit Olympus.
Trajet des rayons lumineux dans un microscope inversé
Explorez le trajet des rayons lumineux dans un microscope inversé de culture tissulaire équipé d'un système d'éclairage diascopique (tungstène-halogène) et d'un système d'éclairage d’épifluorescence (arc de mercure).
Références bibliographiques
Références bibliographiques
La microscopie de fluorescence est en plein renouveau grâce à de nouvelles techniques telles que la microscopie confocale, la microscopie multiphotonique, la microscopie à déconvolution et la microscopie à réflexion interne totale, notamment lorsque celles-ci sont associées à des chromophores et des fluorophores de pointe. Les références bibliographiques ci-dessous ont été utilisées pour la rédaction de la section Fluorescence du manuel d’introduction intitulé Molecular Expressions Microscopy .
Produits Olympus associés :
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