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FV4000

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En voir plus avec la microscopie confocale proche infrarouge

Les technologies améliorées du système ont permis un multiplexage étendu pour voir plus de choses dans une même image.

L’imagerie proche infrarouge (NIR) offre de meilleures capacités de multiplexage en étendant le profil spectral d’excitation (λ_Ex) et de détection (λ_Em) du système FV4000. Cela permet d’utiliser des fluorophores supplémentaires pour réduire au minimum le chevauchement des signaux d’émission.

  • Multiplexez jusqu’à six canaux avec la technologie TruSpectral™ modernisée et nos détecteurs SilVIR™ à haute sensibilité.
  • La fente et le réseau holographique en phase volumique (VPH) hautement efficaces peuvent détecter une plage de longueurs d’onde de 400 à 900 nm, ce qui est unique dans le secteur*, avec un pas minimal de 1 nm.
  • Élargissez votre choix de fluorochromes en utilisant jusqu’à six canaux de détecteurs à large bande ou à décalage vers le rouge pour réduire au minimum les photodommages et diminuer l’autofluorescence.
  • Les combinateurs de lasers modulaires permettent d’utiliser jusqu’à 10 lignes laser de 405 à 785 nm en parallèle.
     

    * En date de mars 2023.

  • Cellules HeLa marquées par six fluorochromes
    Noyaux cellulaires (DAPI ; bleu), membrane cellulaire (AF488 ; vert), pore nucléaire (AF561 ; jaune),
    microtubule (Qdot605 ; magenta), mitochondries (MitoTracker DeepRed ; cyan), actine (AF750 phalloïdine ; gris)

Des composants optiques de haute qualité conçus pour une imagerie de fluorescence proche infrarouge efficace

Les éléments optiques du système FV4000 présentent une transmission élevée de 400 à 1300 nm, notamment le scanner galvanométrique et le scanner résonnant, qui sont revêtus d’argent au lieu du revêtement d’aluminium habituel.

Nos objectifs objectifs X Line™ primés sont corrigés pour les aberrations chromatiques entre 400 et 1000 nm. Ils ont également une ouverture numérique plus grande, une excellente planéité et une transmittance très élevée de l’UV au NIR, ce qui augmente les capacités de multiplexage.

Pour une meilleure fiabilité des colocalisations, notre objectif spécialisé à immersion dans l’huile A Line™ (PLAPON60XOSC2) (ne~1,40) réduit considérablement les aberrations chromatiques pour une analyse stricte des colocalisations.

Série X

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Des images d’un total de 77 positions XYZ à quatre canaux (11 × 7) ont été acquises à l’aide d’un scanner résonnant 1K en 16 minutes pour créer l’image assemblée, ce qui aurait auparavant nécessité 2 heures avec un scanner galvanométrique. Coupe coronale d’un cerveau de souris de lignée H, cyan ; DAPI (noyaux cellulaires), vert ; YFP (neurone), jaune ; cy3 (astrocytes), magenta ; AlexaFluor 750 (microtubule). Échantillon gracieusement fourni par : Takako Kogure et Atsushi Miyawaki, Cell Function Dynamics, RIKEN CBS.

Acquisition ultrarapide d’images confocales de haute qualité

Une combinaison de technologies avancées unique produit des images de haute qualité plus rapidement que les systèmes de microscopie à balayage laser classiques.

  • Acquisition ultrarapide d’images à haute résolution – Le scanner résonnant 1K × 1K à FN20 avec 0,033 µs par pixel et le détecteur SilVIR vous permettent d’acquérir rapidement des images avec un bruit minimal.
  • Des images macro de qualité exceptionnelle – Vous pouvez acquérir rapidement des images macro assemblées d’une qualité exceptionnelle pour optimiser votre temps et votre potentiel de recherche.

Une imagerie à super-résolution simple et précise

Capturez des images en super-résolution à l’aide du microscope FV4000 sans matériel dédié.

  • Observez facilement les structures subcellulaires à l’aide de nos objectifs A Line HR et de notre logiciel de super-résolution (FV-OSR).
  • Le FV-OSR optimise automatiquement l’ouverture confocale pour détecter les composantes à haute fréquence et améliore leur contraste pour atteindre une résolution de 120 nm.
  • Générez des images en super-résolution huit fois plus rapidement qu’avec les systèmes de la génération précédente grâce au détecteur SilVIR et au traitement à la volée.

Comparaison du mode confocal 1AU (à gauche) et du mode super-résolution (à droite)

Des images 3D en haute résolution de l’intérieur d’échantillons épais

Sphéroïde de cellule HeLa marqué au DAPI (cyan, noyaux cellulaires) et à l’AlexaFluor790 (magenta, Ki-67). L’imagerie du volume entier du sphéroïde a été rendue possible par l’utilisation du proche infrarouge à 785 nm, alors que seule l’observation des noyaux des cellules à la surface du sphéroïde était possible avec un laser de 405 nm.

Pour l’imagerie d’échantillons épais, le microscope FV4000 vous permet de prendre des images 3D en haute résolution.

  • Profitez de la longueur d’onde plus grande du proche infrarouge pour pénétrer plus profondément dans les tissus grâce à la large étendue dynamique et à la sensibilité du détecteur SilVIR.
  • Prenez des images plus profondément dans les tissus avec moins de diffusion et d’absorption en tirant parti du fait que les composés diffusant la lumière, comme la mélanine et l’hème, absorbent moins de lumière entre 700 et 1500 nm.
  • Prenez des images nettement plus profondément que ce qui serait possible avec les lasers visibles grâce aux lasers à diodes de 685, 730 et 785 nm sur le FV4000.
  • Les objectifs à immersion dans l’huile de silicone à grande ouverture numérique réduisent au minimum les aberrations sphériques, et l’huile de silicone ne sèche pas : deux avantages pour l’imagerie à intervalles.
  • Améliorez la qualité d’image globale et la résolution Z grâce à la déconvolution TruSight™ pour produire de magnifiques images 3D d’échantillons épais.
  • Profitez d’un processus simplifié, de l’acquisition des images à leur publication, grâce aux algorithmes spécialisés du logiciel cellSens™.

La dynamique précise des cellules vivantes avec moins de photodommages

De façon générale, il est préférable pour la viabilité générale de l’échantillon d’utiliser des grandes longueurs d’onde pour l’excitation de fluorescence pendant des durées les plus courtes possible. En utilisant moins de lumière phototoxique, on peut prendre des images sur de plus longues périodes, ce qui permet d’obtenir des données plus cohérentes et plus reproductibles à partir d’expériences d’imagerie de cellules vivantes.

Le système FV4000 assure non seulement une imagerie à intervalles non destructrice grâce aux lasers à 685, 730 et 785 nm, mais il est également doté d’un compensateur de dérive Z TruFocus Red dédié pour maintenir la position de mise au point. Cette unité TruFocus Red améliorée prend en charge une plus grande plage de longueurs d’onde et est compatible avec une large gamme d’objectifs, notamment nos séries à hautes performances X Line™ et A Line™.

Photostimulation en imagerie à intervalles : la lésion au laser a été réalisée sur des cellules C2C12. La pseudo-couleur verte représente l’application d’un bain de FM 1-43. L’image a été acquise avec un scanner galvanométrique de 2 μs et un objectif UPLSAPO60XOHR. Un laser de 405 nm a été utilisé pour la photolésion et un laser de 488 nm a été utilisé pour l’imagerie. Échantillon gracieusement fourni par : Daniel Bittel et Jyoti Jaiswal, Center for Genetic Medicine Research, Children’s National Research Institute.

Images à intervalles de cellules HeLa marquées à l’Hoechst33342 (noyaux, bleu), MitoTracker Green (mitochondrie, vert), LysoTracker Red (lysosome, jaune), SiR-Tubulin (tubuline, magenta), POR-SA-Halo (ER, cyan). Hoechst33342 : Ex 405 nm/Em, MitoTracker Green : LysoTrakcer Red : SiR-Tubulin : POR-SA-Halo. Échantillon gracieusement fourni par : Masayasu Taki, Ph.D., Institute of Transformative Bio-Molecules (WPI-ITbM), université de Nagoya, Japon, et Yuichi Asada et Ryusei Aruga, Graduate School of Science, université de Nagoya, Japon.

Série d’images prises à intervalles sur 17 heures de cellules HeLa marquées avec du MitoTracker Red (mitochondries, magenta), POR-SA-Halo (ER, cyan). MitoTracker Red : Ex 561 nm/Em, POR-SA-Halo : Ex 730 nm/Em. Échantillon gracieusement fourni par : Masayasu Taki, Ph.D., Institute of Transformative Bio-Molecules (WPI-ITbM), université de Nagoya, Japon, et Yuichi Asada et Ryusei Aruga, Graduate School of Science, université de Nagoya, Japon.

Des images des couches profondes d’une grande clarté

Utilisez nos objectifs à immersion dans l’huile de silicone avec le microscope FV4000 et réalisez des images claires des caractéristiques et des structures d’intérêt au plus profond de votre échantillon. L’huile de silicone a un indice de réfraction proche de celui des cellules vivantes ou des tissus, ce qui réduit considérablement l’aberration sphérique par rapport à l’air, à l’eau ou à d’autres huiles. Avec moins d’aberrations, il est possible d’obtenir des couches profondes de votre échantillon. En outre, l’huile d’immersion de silicone ne sèche pas à 37 ℃ (98,6 °F), ce qui la rend efficace pour l’imagerie à intervalles de longue durée.

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