Surveillance à distance de la culture primaire de cellules souches mésenchymateuses dérivées de la moelle osseuse
Plan expérimental
La cellule souche mésenchymateuse dérivée de la moelle osseuse est multipotente. En conséquence, elle fait l’objet d’intenses recherches et d’applications cliniques en tant que source de cellules pour la médecine régénérative. Lorsque des boîtes de Pétri sont ensemencées avec du liquide ou des cellules de la moelle osseuse, les cellules souches mésenchymateuses prolifèrent sous forme de cellules adhérentes.
Ainsi, les cellules souches mésenchymateuses peuvent être séparées des cellules sanguines flottantes. Nous rapportons ici les résultats de la surveillance à distance de la culture primaire de cellules souches mésenchymateuses à l’aide du système de surveillance de l’incubation Olympus Provi™ CM20.
Procédures expérimentales
Une plaque à 24 puits (Sumitomo Bakelite, cat. no MS-80240) a été ensemencée par des cellules de moelle osseuse humaine acquises dans le commerce à une densité de 950 000 cellules/0,5 ml/puits dans du milieu modifié de Dulbecco d’Iscove (IMDM) enrichi avec 10 % de sérum de veau fœtal (SVF) et 1 % de pénicilline-streptomycine. Des images des cellules ont été acquises à l’aide du
système CM20 toutes les heures avec mise au point automatique. Comme la prolifération des cellules adhérentes a été observée au jour 4 de la culture, les cellules ont été surveillées jusqu’à 6 jours après l’échange de milieux.
Résultats
Juste après l’ensemencement
Jour 4 (avant l’échange de milieux)
Jour 4 (après l’échange de milieux)
Jour 6
Figure 1. Culture primaire de cellules souches mésenchymateuses dérivées de la moelle osseuse. Les flèches montrent les cellules souches mésenchymateuses dérivées de la moelle osseuse.
La plupart des cellules étaient des cellules sanguines, et aucune cellule souche mésenchymateuse n’a été observée immédiatement après l’ensemencement. Cependant, le jour 4 suivant l’ensemencement, des cellules souches mésenchymateuses présentant la morphologie d’un fuseau mitotique sont apparues. Par la suite, le milieu a été changé pour éliminer les cellules sanguines. Le jour 6 suivant
l’ensemencement, les cellules souches mésenchymateuses se sont multipliées en un grand nombre de cellules.
Avantages du recours aux évaluations du système de surveillance de l’incubation
La culture primaire des cellules souches mésenchymateuses dérivées de la moelle osseuse doit être effectuée aussi délicatement que possible jusqu’à ce que les cellules adhérentes apparaissent. Il faut éviter autant que possible toute agitation susceptible de se produire lors de l’observation microscopique ou du changement de milieu. Ici, nous montrons que le système CM20 nous permet de surveiller à distance les cellules
sous incubation. En utilisant le système CM20, nous avons raccourci le temps de manipulation des cellules et avons pu procéder au reste de l’expérience au bon moment.
Remerciements
Cette note d’application a été rédigée avec l’aide du chercheur suivant :
Dr Takahiro Yamaguchi, chercheur principal, ACEL, Inc.