Réponse aux médicaments : effet sur les cellules situées à l’intérieur et à l’extérieur de cultures cellulaires 3D

L’effet des médicaments sur les cultures cellulaires 3D a été évalué par imagerie cellulaire, 
en particulier en ce qui concerne les différences entre l’effet sur les cellules situées à l’extérieur et l’effet sur les cellules situées à l’intérieur des cultures cellulaires 3D telles que les sphéroïdes.

Objectifs

Ces dernières années, des cultures cellulaires 3D, comme les sphéroïdes, ont été utilisées pour étudier la réponse des cellules aux médicaments. Cependant, la différence de réponse entre les cellules situées à l’intérieur et celles situées à l’extérieur des cultures cellulaires 3D n’a pas été étudiée. Au cours de cette étude, cette différence a été étudiée par l’observation de sphéroïdes à différentes profondeurs à l’aide d’un microscope confocal.

Préparation des échantillons

L’indicateur FUCCI est un indicateur de cycle cellulaire comprenant deux rapporteurs fluorescents de deux couleurs différentes. Des sphéroïdes composés de cellules HT-29 transgéniques exprimant l’indicateur FUCCI ont été mis en contact avec un milieu contenant 10 nM de cisplatine. Après une incubation de 96 heures, le milieu contenant la cisplatine a été éliminé, et les cellules ont été fixées au formol à 4 % puis traitées par un réactif de clarification.

Conclusion
Acquisition et analyse d’images en fluorescence

Des images des sphéroïdes susmentionnés ont été prises au microscope confocal à fluorescence tous les 5 μm depuis la surface des sphéroïdes jusqu’à 150 μm de profondeur. Le rapport entre les signaux rouges (phases G0 et G1) et les signaux verts (phases S, G2 et M) dans chaque couche a été analysé à l’aide du logiciel d’analyse. En l’absence de cisplatine, aucune différence significative entre le rapport signaux rouges/signaux verts des cellules des couches externes et celui des couches internes des sphéroïdes n’a été observée (figure 1). En présence d’un milieu avec 10 nM de cisplatine, le rapport signaux rouges/signaux verts augmente à mesure que l’on s’éloigne de la surface (figures 2 et 3).

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