Évaluation de l’efficacité de médicaments : évaluation quantitative de la taille des sphéroïdes

L’efficacité du 5-FU, un anticancéreux, a été évaluée par la mesure de la surface de coupes transversales de sphéroïdes à partir de l’analyse d’images en fond clair à l’aide du système.

Objectifs

L’intérêt des sphéroïdes tumoraux 3D comme modèles de tumeurs solides in vitro s’est imposé au cours des dernières années. La réduction de la taille des sphéroïdes 3D induite par le traitement par des anticancéreux constitue un excellent indicateur de leur capacité à inhiber la prolifération cellulaire. L’efficacité des anticancéreux peut être évaluée de manière quantitative et efficace par l’analyse de la réduction de la taille des sphéroïdes sur des images en fond clair à l’aide d’un microscope associé au système. Au cours de cette étude, la réduction de la taille de sphéroïdes 3D de cellules HT-29 induite par le 5-FU a été évaluée de manière quantitative.

Préparation des échantillons

Les sphéroïdes ont été préparés par ensemencement du milieu de culture par une suspension de cellules HT-29 dans une microplaque de 96 puits PrimeSurface® (SUMITOMO BAKELITE CO., LTD), à raison de 750 cellules par puits. Le 5-FU a été ajouté aux sphéroïdes 3D quatre jours après le début de la culture cellulaire, puis les cellules ont été cultivées pendant quatre jours supplémentaires. Les monocouches 2D de cellules HT-29 ont été préparées dans une microplaque pour culture de cellules adhérentes et le 5-FU a été ajouté aux monocouches 2D en suivant le même protocole que précédemment.

Conclusion
Acquisition et analyse d’images de sphéroïdes 3D ou de monocouches 2D de cellules HT-29

Des images en fond clair de microplaques contenant des sphéroïdes 3D de cellules HT-29 ont été acquises à l’aide du système (figure 1). Pour chaque sphéroïde, l’acquisition à chaque concentration de 5-FU de plusieurs images d’un plan équatorial du sphéroïde a été suivie d’une projection d’intensité moyenne et d’une analyse statistique. La surface des coupes transversales des sphéroïdes 3D de cellules HT-29 a diminué à mesure que la concentration en 5-FU augmentait, ce qui indique que le 5-FU inhibe la prolifération cellulaire dans les sphéroïdes (figure 2). Concernant les monocouches 2D de cellules HT-29 marquées au Hoechst 33342, la surface d’adhérence a été calculée à partir des images en fluorescence acquises avec le système. La surface d’adhérence des monocouches 2D de cellules HT-29 a diminué à mesure que la concentration en 5-FU augmentait (figure 2). Ces résultats indiquent que le système permet d’évaluer l’efficacité d’un médicament dans des sphéroïdes 3D ou des monocouches 2D.

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