Sistemas Abbelight SAFe

Tecnología ASTER para una alta precisión de localización a lo largo de un amplio campo de visión

Todos los nanoscopios SAFe comparten el mismo exclusivo sistema de excitación, basado en la tecnología de escaneo adaptable para regiones de excitación sintonizable (Adaptable Scanning for Tunable Excitation Regions, ASTER)¹. El ASTER genera una iluminación homogénea en los modos TIRF, HiLo y EPI mientras aplica técnicas de microscopía de localización de una sola molécula (SMLM), como PALM, STORM o PAINT, con una precisión de localización de 10 a 15 nm en 3D sobre un campo de visión (FOV, sigla en inglés) de 150 x 150 µm².

Esquema del ASTER y los patrones de iluminación resultantes

El método de iluminación del ASTER ofrece una novedosa capacidad que permite aprovechar el campo de visión completo de las cámaras sCMOS para un procesamiento de imágenes usando las técnicas SMLM y TIRF.

El ASTER usa dos espejos galvanométricos para controlar la iluminación en el plano de la muestra. A medida que el haz de excitación mantiene su posición en el plano focal posterior (BFP, siglas en inglés), la rotación angular de un galvanómetro induce a un ángulo similar en el BFP, lo que corresponde a una posición diferente en el plano de la muestra.

Mediante la aplicación de patrones específicos, como el escaneo de trama, el ASTER es capaz de proporcionar una excitación uniforme en campos de visión sintonizables de hasta 150 × 150 µm² para todos los modos de excitación (EPI, HiLo y TIRF).

_{Células U2OS teñidas para detectar microtúbulos (anticuerpo alfa-tubulina) CF660, mitocondrias (anti-TOMM20) CF680 y cromatina (EdU) AF647. Técnica dSTORM multicolor 2D simultánea con discriminación espectral.}

Discriminación espectral: Procesamiento de imágenes multicolor con láser, tampón químico y adquisición

Si bien la nanoscopia 3D ha revolucionado el campo de la microscopía de fluorescencia al alcanzar resoluciones sin precedentes, el procesamiento de imágenes multicolor sigue siendo un reto para la SMLM. Esta dificultad deriva de varios factores, como las aberraciones cromáticas, la elección de tampones químicos y la elección de colorantes compatibles con las moléculas individuales.

Con el fin de superar este reto, Abbelight ha implementado la discriminación espectral para la SMLM. Mediante la separación de colorantes de rojo lejano con un cubo dicroico y algoritmos radiométricos, la discriminación espectral activa permite el procesamiento de imágenes multicolor simultáneo en SMLM de forma equilibrada.

Referencias