La fuente de luz es una de las partes más importantes de un microscopio. Conseguir una iluminación correcta permite observar óptimamente las muestras, así como capturar imágenes y analizar datos. De acuerdo con el tipo de la fuente de luz de excitación fluorescente (lámpara de arco de mercurio, lámpara de halogenuros metálicos de mercurio o LED), existen diferentes formas de mejorar su sistema.

Formando la segunda parte de nuestra serie de publicaciones relativas a las optimizaciones de microscopios, este blog proporcionará consejos útiles para optimizar su fuente de luz de fluorescencia.

Lámparas de arco de mercurio

Las lámparas de arco de mercurio tradicionales, por lo general, están acopladas a un recinto (o carcasa) de lámpara conectado directamente al microscopio; no obstante, su salida puede estar sujeta a una guía de luz en sistemas como los microscopios confocales. Para maximizar la vida útil de estas fuentes de luz, aplique las siguientes cuatro prácticas recomendables respetando las instrucciones del fabricante:

1. No encienda ni apague la lámpara con frecuencia.

   ¿Necesitas salir de la habitación por un instante? Deje la lámpara encendida. La activación/desactivación frecuente de este dispositivo acorta su vida útil. Si bien algunas fuentes de alimentación para lámparas de mercurio cuentan con una función de espera de enfriamiento para evitar cambios frecuentes, esta característica ayuda sobre todo a prolongar la vida útil de la bombilla.

2. Asegúrese de que la bombilla esté fresca.

   La intensidad de las bombillas de mercurio comienza a disminuir tras 70 horas de uso. Después de 200 horas, son significativamente más débiles. Asegúrese de cambiar la bombilla en conformidad con la vida útil nominal (200 o 300 horas). Deseche siempre estas bombillas en conformidad con la política de residuos peligrosos de su organización.

3. Alinee la bombilla.

   Una alineación adecuada da como resultado una iluminación de campo homogénea. Consulte el manual del usuario específico a fin de proceder con el proceso correcto destinado a su portalámparas. Una forma fácil de comprobar si la bombilla está desalineada es colocando una tarjeta de papel blanco en la platina del microscopio (vale la tarjeta de presentación de su representante de Olympus). A continuación, obsérvela con una magnificación baja usando luz de excitación azul. La celulosa emite fluorescencia de forma natural, por lo que la iluminación desigual será claramente obvia.

4. Tenga un repuesto a la mano.

   Tenga siempre al menos una bombilla de repuesto a la mano en el caso de producirse una falla. A veces, las bombillas viejas de mercurio simplemente dejan de encenderse y el usuario no quiere verse desprovisto de una bombilla justo en el momento de procesar las imágenes de las muestras. Recuerde cambiar la bombilla según las instrucciones del fabricante (por lo general, después de 200 o 300 horas, según la bombilla) y deseche la bombilla vieja como residuo peligroso de mercurio.

Sistemas de lámparas de mercurio y halogenuros metálicos

Los sistemas de lámparas de mercurio y halogenuros metálicos emplean una bombilla de haluro metálico de larga duración, precentrada, y inhibida con mercurio. Estas bombillas suelen durar 2000 horas y son instaladas de forma precentrada en la fuente de energía principal. Por lo general, la iluminación es transmitida al microscopio a través de una guía de luz líquida (LLG), aunque existen algunas unidades de montaje directo en el mercado.

Ejemplo de la lámpara de halogenuros metálicos

Estas fuentes de luz preservan una salida relativamente estable durante las primeras 1000 horas, después de las cuales la intensidad comienza a disminuir. Consulte la información técnica del fabricante para obtener información sobre la potencia de salida espectral a lo largo del tiempo y los reemplazos conforme a las instrucciones. Al igual que con las bombillas de mercurio, puede que desee desechar una de estas bombillas viejas en conformidad con la política de residuos peligrosos de su organización.

Mucha gente no percibe que la guía de luz líquida se degrada con el uso y se vuelve menos eficiente tras 4 000 o 6000 horas transcurridas. Si su fuente de energía principal se dota de un obturador incorporado, utilícelo en lugar del del microscopio para bloquear la luz de excitación. Esto ayudará a mantener la eficiencia de la LLG por más tiempo.

Sin embargo, deberá planificar el cambio de la guía de luz líquida después de reemplazar por segunda o tercera vez la bombilla. Las guías de luz líquida no necesitan estar centradas, pero deben estar completamente arraigadas tanto en el enchufe de la fuente de energía como en el adaptador de la LLG montado en el microscopio. Asegúrese de seguir las instrucciones del fabricante cuando reemplace la LLG.

Guías de luz líquida que transmiten luz al microscopio

Fuentes de luz LED

La actualización de una fuente de luz de fluorescencia a base de mercurio a una unidad de diodo emisor de luz (LED) tiene muchos beneficios para el rendimiento y mantenimiento del microscopio; entre ellos, sobresalen:

• Picos espectrales en mayor número y más brillantes que el mercurio.
• Sistema de activación/desactivación instantánea sin calentamiento.
• Vida útil ultra prolongada (20 000 horas o más).
• No es necesario comprar ni alinear bombillas (¡un verdadero alivio!).
• No perjudica el medio ambiente debido al menor consumo de energía y la ausencia de mercurio.

Muchas fuentes LED producen una salida espectral máxima mucho más brillante que el mercurio en longitudes de onda clave como de 488, 568 y 647. Hay modelos que poseen entre tres y 16 longitudes onda de excitación independientes y de conmutación rápida.

Las fuentes LED presentan tiempos de encendido y apagado (activación/desactivación) muy rápidos, y la mayoría ofrecen intensidades variables; algunas conforme a la longitud de onda. Estas pueden obturar la longitud de onda mediante un controlador manual o activarse a través de una señal USB o de lógica de transistor a transistor (TTL) desde su PC/software. Aquellas que ofrecen longitudes de onda con activación individual son fantásticas para actualizar un microscopio manual antiguo a la fluorescencia multicanal automatizada (gracias a un conjunto de filtros multicanal). Vaya aun más lejos y agregue un dispositivo de enfoque Z, una cámara ambiental y el software apropiado para convertir ese antiguo microscopio manual invertido en un sistema de procesamiento de imágenes a intervalos de células vivas.

Los sistemas LED son mucho más fáciles de manejar porque no requieren alineación ni cambio de bombillas. Duran decenas de miles de horas, no producen desperdicios de mercurio y consumen mucho menos energía. Por lo tanto, es posible ampliar la gama de aplicaciones que puede administrar con su microscopio antiguo manteniendo un costo total de propiedad mucho más bajo.

Más consejos de nuestros expertos para mejorar su microscopio

Olympus desea que usted pueda sacar el máximo provecho de su sistema microscópico existente con facilidad. Es por eso que se ha publicado una serie de blogs sobre el tema para que este proceso sea lo más simple y plácido posible.

Asegúrese de revisar, de no haberlo hecho, la primera parte de nuestra serie relativa a la optimización de microscopios: Cinco maneras de ampliar tanto la vida útil como el rendimiento de su microscopio. Y, manténgase al tanto de la siguiente parte de publicaciones para conocer más actualizaciones simples a fin de lograr un procesamiento de imágenes estable de células vivas.

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