1. ¿Cuál es el tamaño de su muestra?

Los objetivos de los microscopios Olympus incorporan un rango de magnificaciones que van de 1.25x a 150x. Este es el primer parámetro que debemos considerar para encontrar el mejor objetivo para su aplicación. Y, que al ser combinado con la magnificación de los oculares, determina la magnificación total del microscopio.

2. ¿Cuáles son las características más pequeñas que le gustaría observar en su muestra?

El segundo parámetro más importante de un objetivo de microscopio es la apertura numérica (A. N.). La A. N. mide la capacidad de recogida de luz. Es un factor importante para determinar la resolución, la profundidad de enfoque y el brillo de las imágenes. Los objetivos con una A. N. grande recogen un rango más amplio de luz y proporcionan imágenes más claras y con mayor resolución.

La A. N. también es importante para observar estructuras muy finas o detectar señales tenues durante la observación de fluorescencia. Cuando tenga que decidir qué objetivo de microscopio resolverá la característica más diminuta de su muestra, piense en la A. N. Cuando sopese sus opciones, tenga en cuenta que la apertura numérica va del 0.04 al 1.7.

3. ¿Cuáles son sus requisitos relativos al campo de visión y profundidad de campo de la imagen?

Dos características importantes del objetivo de microscopio es el número de campo y la profundidad de campo.

• El número de campo de visión, o número de campo, es el diámetro del campo de visión en su microscopio óptico. Se expresa en milímetros y se mide en el plano de imagen intermedio. Tenga en cuenta que los objetivos aprocromáticos planos modernos y otros objetivos de campo plano especializados suelen tener un campo utilizable que va de 22 a 26,5 milímetros (o más si se combinan con los oculares de campo amplio).
• La profundidad de campo del objetivo es el rango axial, que le permite enfocar un objetivo sin realizar cambios considerables en la nitidez de la imagen. Este valor varía radicalmente de objetivos de apertura numérica baja a alta y suele reducir a medida que aumenta la apertura numérica.

4. ¿Cuál es su requisito de resolución?

La resolución del objetivo del microscopio determina la distancia más pequeña que puede observarse entre dos objetos. Es directamente proporcional a la longitud de onda de iluminación de la luz e inversamente proporcional a la A. N.

Cuanto más alta sea la A. N., más pequeña será la distancia entre los dos objetos. Como hemos mencionado anteriormente, es fundamental escoger la A. N. adecuada para su aplicación a la hora de determinar la resolución de su sistema de microscopio.

5. ¿Qué distancia de trabajo se necesita?

La distancia de trabajo (D. T.) es la distancia desde la lente delantera del objetivo hasta la superficie más cercana del cubreobjetos cuando la muestra está enfocada. La D. T. es inversamente proporcional a la A. N., lo que significa que los objetivos con una A. N. alta suelen tener distancias de trabajo bajas.

Si su aplicación necesita aplicaciones sin cubreobjetos que requieren una distancia de trabajo mayor entre el plano focal y la punta del objetivo (p. ej. muestras con topografía irregular, estructuras delicadas o límites mecánicos del conjunto óptico global), entonces los objetivos más adecuados para su aplicación pueden ser los objetivos de larga distancia de trabajo LMPLFLN o SLMPLN de Olympus.

6. Si tiene una muestra de fluorescencia, ¿qué nivel de brillo tiene su señal de fluorescencia?

Si trabaja con muestras que emiten una señal de fluorescencia débil, recomendamos usar los objetivos con una A. N. alta porque recogen más luz. Olympus tiene una amplia gama de objetivos de microscopio que ofrecen una excitación de fluorescencia de ultravioleta (UV) a infrarrojo cercano (NIR).

7. ¿Usa la creación de imágenes por fluorescencia multicanal o unicanal?

Para compensar la corrección cromática pueden usarse varios tipos de objetivos: acromáticos, semiapocromáticos y apocromáticos. Los objetivos acromáticos proporcionan una cantidad mínima de corrección, los semiapocromáticos (o fluoritos) tienen correcciones esféricas adicionales y los apocromáticos ofrecen la corrección cromática más alta.

Si su aplicación necesita utilizar la fluorescencia multicanal, recomendamos usar los objetivos apocromáticos prologados UPLXAPO de Olympus.

8. ¿Qué método de observación emplea?

Al tratar con muestras demasiado gruesas, demasiado delgadas o birrefringentes, los investigadores aplicarán diferentes métodos de observación de aquel de campo claro. Las técnicas más comunes son el campo oscuro, el contraste de interferencia diferencial (DIC), el contraste de fase y la polarización. Olympus ofrece objetivos especiales para estos métodos de observación diferentes.

9. ¿En qué medio se encuentra su muestra?

Muchos objetivos de microscopios se han diseñado para visualizar muestras con aire como medio, mientras que otros utilizan un medio de inmersión que contiene un índice de refracción más alto para permitir una alta A. N. y altos niveles de resolución.

Por ejemplo, la utilización del aceite de inmersión en lugar de aire como medio de visualización puede aumentar la resolución por un factor de 1,5 aproximadamente. Los medios de inmersión más comunes son el aire, el agua, el aceite y la silicona. Si escoge el objetivo más adecuado para su medio obtendrá una mejor calidad de imagen.

10. ¿Está usando un sistema de microscopio avanzado?

Olympus ofrece objetivos especiales para sistemas ópticos avanzados como los microscopios confocales, confocales de disco giratorio, excitación de multifotón y fluorescencia de reflexión interna total (TIRF). Si trabaja con estos sistemas, es fundamental que escoja el objetivo apropiado para su aplicación.