Evaluación de la eficacia de fármacos: Evaluación cuantitativa del tamaño del esferoide

La eficacia del fármaco anticancerígeno 5-FU fue evaluado a través de la cuantificación de las sección transversal de los esferoides basándose en el análisis de la imagen de campo claro con el sistema.

Objetivos

Hace poco, los esferoides tumorales 3D han comenzado a considerarse una herramienta útil que sirve como modelo in vitro de tumores sólidos. El cambio en el tamaño de los esferoides 3D, inducido por el tratamiento de los fármacos anticancerígenos, es un indicador muy relevante de su capacidad para inhibir la proliferación celular. La eficacia de los fármacos anticancerígenos puede ser evaluada de forma cuantitativa y eficiente a través de un análisis de la imagen de campo claro, que expone el cambio en el tamaño del esferoide, usando un microscopio junto  con el sistema. En este estudio, se evaluaron de modo cuantitativo los cambios de tamaño en los esferoides de HT-29 que son inducidos por el 5-FU.

Preparación de muestras

Se cultivó una suspensión celular de HT-29 en una placa PrimeSurface® 96U (SUMITOMO BAKELITE CO., LTD) con una proporción de 750 células/pocillo para preparar los esferoides. Se añadió 5-FU a los esferoides 3D cuatro días después del inicio del cultivo celular, y el cultivo se prolongó durante otros cuatro días. Bajo las mismas condiciones, se prepararon monocapas 2D de HT-29 en una microplaca adhesiva para células, y después se añadió el 5-FU a las monocapas 2D.

Conclusión
Adquisición y análisis de imágenes de esferoides 3D o monocapas 2D compuestas por HT-29

Las imágenes de campo claro de las microplacas que contienen esferoides en 3D de HT-29 se obtuvieron con el sistema (Figura 1). Varias imágenes dotadas de un plan ecuatorial fueron obtenidas para un esferoide, seguidas de una proyección de la intensidad media y de un análisis estadístico de cada concentración del 5-FU. La sección transversal de los esferoides en 3D de HT-29 disminuyó con un aumento en la concentración de 5-FU, lo que indicaba que el 5-FU impedía la proliferación celular en los esferoides (Figura 2). En el caso de la monocapa 2D de HT-29, teñida con Hoechst 33342, la zona de adhesión se calculó en función de las imágenes fluorescentes obtenidas con el sistema. La zona de adhesión de las monocapas 2D de HT-29 disminuyó con un aumento de la concentración de 5-FU (Figura 2). Estos resultados indican que el sistema permite evaluar la eficacia del fármaco en los esferoides 3D y las monocapas 2D.

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