Respuesta al tratamiento con fármacos: Análisis del ciclo celular con cultivos celulares 3D

El efecto de los fármacos anticancerígenos en los cultivos celulares 3D puede evaluarse a través del procesamiento de imágenes celulares.
En combinación con el indicador de ciclo celular Fucci, es posible investigar el efecto de un fármaco anticancerígeno en el ciclo celular.

Objetivos

Hace poco, además de los cultivos celulares 2D convencionales, se han comenzado a usar los cultivos celulares 3D en el estudio mecanicista de los fármacos anticancerígenos. En este estudio, se analizó la respuesta de los cultivos celulares en 3D a los fármacos en términos de ciclo celular y muerte celular.

Preparación de las muestras

Fucci es un indicador del ciclo celular que utiliza un esquema de dos colores. Se cultivó una suspensión celular de Fucci que expresa células HT-29 transgénicas en una placa de 96 pocillos con base en U. Los cultivos celulares fueron expuestos a cisplatino diluido en serie (0-10 nM) 72 horas después del inicio del cultivo celular. Después de un periodo de incubación de 96 horas, el medio que contenía cisplatino fue retirado de los cultivos celulares y estos últimos fuero fijados en formalina al 4%.

Conclusión
Adquisición y análisis de imágenes fluorescentes

Las imágenes fluorescentes confocales de cultivos celulares 3D se obtuvieron con el uso combinado del sistema de análisis de imágenes celulares (Ex. 488 nm y 561 nm). Los datos de luminosidad de fluorescencia fueron tratados con una proyección de intensidad máxima, seguida de la identificación del núcleo con el software de análisis y recuento celular. El número de células HT-29 en esferoides 96 horas después de la adición de cisplatina puede verse en la Figura 1. El análisis de la señalización de doble color indicó que el tratamiento de los cultivos celulares 3D con cisplatino permitió reducir las fases G0 y G1 del ciclo celular, así como el número de células (Figuras 2 y 3).

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